אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:41 דק׳ • July 8th, 2025
קחו מודל של מחסום דם-מוח במבחנה, או BBB, המורכב משני תאים המופרדים על ידי קרום נקבובי.
התא העליון או הלומינלי מכיל תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים. תאים אלה מבטאים צמתים הדוקים, המחקים את האנדותל של מחסום הדם-מוח המגביל את מעבר התאים והמולקולות.
התא התחתון או הבלומינלי מכיל נוירונים, אסטרוציטים ומיקרוגליה, המייצגים את פרנכימת המוח.
הכנס וירוס נוירוטרופי לתא הלומינלי כדי לדמות זיהום הנישא בדם ולדגור.
הנגיף עובר אנדוציטוז על ידי תאי האנדותל, עובר סחר תוך תאי בתוך שלפוחיות ומשתחרר בצד האלומינלי.
לאחר הדגירה, הסר את החדר העליון. דגימת המדיום מהצד הבלומינלי כדי להעריך את הכמות הנגיפית, המאשרת את החצייה המוצלחת של שכבת האנדותל.
מוסיפים מדיום טרי ודוגרים שוב.
הנגיף נכנס לתאים העצביים באמצעות אנדוציטוזיס, משכפל ומשחרר צאצאים ויראליים.
כמת את העומס הנגיפי החוץ-תאי המוגבר כדי לאשר פלישה עצבית ושכפול ויראלי.
לאחר התקנת מכשיר מוח מיני BBB, כפי שהודגם, הוסף 3,500 יחידות יוצרות פלאק של זן הנגיף הנוירוטרופי הצרפתי של נגיף הקדחת הצהובה, מדולל ב-50 מיקרוליטר של מדיום תאי אנדותל FBS 2% בזהירות רבה על גבי התא הלומינלי. לחסן את מוח המיני BBB הבקרה עם 50 מיקרוליטר של 2% מדיום תאי אנדותל FBS ללא וירוס. לאחר מכן, הנח את מכשיר המוח המיני BBB החשוף לנגיף באינקובטור למשך 24 שעות.
למחרת, הסר את התוספות כדי לקבוע את חדירות תאי האנדותל בבאר נלווית, כפי שהודגם זה עתה, ושמור מיליליטר אחד של דגימה מכל באר כדי לקבוע את טיטר הנגיף בתא האלומינלי.
מתחת לתוספת בעדינות כדי למנוע דליפה של תא הלומינל לתא האלומינלי.