צביעה אימונופלואורסצנטית של מוחות דרוזופילה להדמיה חד-תאית של תאי גליה

התחל עם מוחות מזבובי דרוזופילה טרנסגניים, המכילים סוגים שונים של תאי גליה המכילים מערכת רקומבינאז ספציפית לתא.

הוא מניע את הביטוי של חלבון פני התא המאוחה לאפיטופים אנטיגניים שונים על אותו סוג תאים.

טפל ברקמה עם קיבוע כדי להצליב חלבונים ולשמר את ארכיטקטורת הרקמה.

שטפו כדי להסיר עודפי קיבוע.

הוסף חלבונים חוסמים כדי להסוות אתרי קשירה לא ספציפיים כדי להפחית את צביעת הרקע.

דגרו על הרקמה עם קוקטייל נוגדנים ראשוני שנקשר לאפיטופים השונים המתבטאים בתאי גליה.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים ראשוניים לא קשורים.

דגירה עם נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים משניים לא קשורים.

הרכיבו את המוח בתוך מרווח הדמיה והניחו כיסוי. המרווח יוצר תא לרקמה, ושומר על המבנה התלת מימדי שלה.

תאים שונים מאותו סוג גליה המסומנים בנוגדנים מצומדים פלואורופוריים שונים מאפשרים הבנה של אינטראקציות תא-תא.

העבירו את המוחות המבודדים באמצעות קצה פיפטה P10 לתוך צינור מיקרו-צנטריפוגה בנפח 200 מיקרוליטר עם תמיסה מקבעת. לעולם אל תטפל במוח באמצעות מלקחיים. דגירה על הרקמות המוגנות מפני אור. הימנע משאיבת המוח במהלך העברת תמיסות.

כדי להסיר את הקיבוע, השתמש בשלוש שטיפות או יותר של 15 דקות עם תמיסת כביסה. לאחר מכן, חסום את הרקמות בתמיסת חסימה למשך 30 דקות או יותר. לאחר מכן, החליפו את תמיס