העברה מיטוכונדריאלית בסיוע צנטריפוגה לתאי גזע גליובלסטומה

התחל עם צינור המכיל מיטוכונדריה תורם בצבע אדום עמוק עם תווית פלואורסצנטית.

הוסף מדיום התפשטות קר כדי לפזר את המיטוכונדריה.

הוצא את תמיסת המיטוכונדריה ליד תחתית הבאר המכילה תאי גזע גליובלסטומה מותאמים או GSCs.

תאי סרטן המוח המותאמים הללו מסומנים בצבע פלואורסצנטי כחול ומכילים מיטוכונדריה אנדוגנית עם תווית פלואורסצנטית אדומה.

המתלה מכסה את כל שטח הבאר, ומפיץ באופן אחיד את המיטוכונדריה.

צנטריפוגה את צלחת התרבות כדי לקרב את המיטוכונדריה לתאים לצורך האינטראקציה ביניהם.

כעת, דגרו על צלחת התרבות.

קרום התא יוצר שלפוחיות גדולות הבולעות חומר חוץ-תאי, כולל המיטוכונדריה התורמת.

לאחר מכן התאים מפנימים את השלפוחיות הללו, ומשחררים את המיטוכונדריה התורם לתוך הציטופלזמה שלהם, מה שעלול לשנות את חילוף החומרים והתפקודים של GSC.

התבונן בתאים תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.

לאחר ניתוח תמונה, נוכחותם של תאים כחולים המכילים מיטוכונדריה תורם ירוק יחד עם מיטוכונדריה אנדוגנית אדומה מאשרת העברה מיטוכונדריאלית מוצלחת.

כדי להעביר מיטוכונדריה MSC מבודדת ל-GSCs, הוסף 200 מיקרוליטר של מדיום התפשטות GSC מקורר מראש לגלולה המיטוכונדריאלית. לדלל את ההכנה המיטוכונדריאלית במדיום התפשטות GSC כדי לאפשר באופן עקבי תוספת של 20 מיקרוליטר של תרחיף מיטוכונדריאלי ל-GSCs.

לאחר מכן, הוסיפו לאט את המיטוכונדריה קרוב לתחתית הבאר. צנטריפוגה א