קישור צולב של חלבוני משטח עצביים במוח העכבר באמצעות בדיקת קישור צולב כימית

התחל עם מוח עכבר מבודד במאגר קר כקרח.

העבירו את המוח למטריצה מוחית, כאשר הצד הגחוני פונה כלפי מעלה.

הכנס סכיני גילוח כדי לחתוך באופן סדרתי את החלק הקדמי של המוח.

הרם את הפרוסות על ידי החזקת הלהבים יחד, והשאיר את החלק האחורי מאחור. הפרד את סכיני הגילוח והניח אותם על משטח צונן כשפרוסות המוח פונות כלפי מעלה.

בחר את הפרוסה הרצויה וחלץ את אזור העניין.

מחלקים וטוחנים את הרקמה.

העבירו את הרקמה הטחונה לצינור המכיל נוזל מוחי בתוספת הכימיקל BS3.

הפוך וערבב את הצינור כדי לשבור את הרקמה לחתיכות קטנות יותר, ואז לדגור בסיבוב.

BS3, כימיקל אטום לקרום התא, מקשר בין חלבוני פני השטח העצביים כמו קולטני GABA בעוד קולטני GABA פנימיים נשארים ללא שינוי.

הוסף גליצין כדי להרוות את תגובת הקישור הצולב.

המדגם מוכן להערכה של רמות קולטני GABA על פני השטח.

כדי להתחיל, הסר במהירות את המוח מהגולגולת של העכבר השחור C57 6J שהומת בהמתת חסד. טבלו אותו בצלחת פטרי המכילה PBS קר כקרח למשך 10 עד 15 שניות. הנח את המוח המקורר לתוך מטריצת המוח על קרח הפונה לצד הגחון כלפי מעלה. כדי לחתוך את המוח באופן עטרתי, הכנס את סכין הגילוח הראשון דרך הגבול בין נורת הריח לפדונקל הריח. באמצעות שלושה עד ארבעה סכיני גילוח נוספים, חתכו באופן סדרתי את החלק הקדמי של המוח במרווחים של מילימטר אחד.

החזק את סכיני הגילוח המוכנסים יחד כדי להרים את פרוסות העטרה ממטריצת המוח, ולהשאיר את החלק האחורי מאחור. בעזרת מלקחיים, הפרד את סכיני הגילוח זה מזה, והניח אותם על המשטח השטוח והקריר כשפרוסת המוח פונה כלפי מעלה.

כדי לדגום את קליפת המוח הקדם-מצחית, בחרו בפרוסות השנייה והשלישית האחוריות לפרוסה הראשונה המכילה את פדונקל הריח. בעזרת אגרוף רקמות או מלקחיים, הסר את האזור הרצוי. הניחו את הטישו על סכין הגילוח המצונן וחלקו אותו באופן שווה לשני חלקים. השתמש בקצה העדין של המלקחיים כדי לטחון כל רקמה לחתיכות על סכין הגילוח בתנועות אנכיות מרובות. ספייק את הצינור המסומן מראש המכיל נוזל מוחי מלאכותי עם 30 מיקרוליטר של תמיסת BS3. לאחר מכן, העבירו מיד את הרקמות הטחונות לצינור הרצוי.

לתגובת קישור צולב, הפוך את הצינור המכיל רקמה ותמיסה כדי לשבור את גושי הרקמה לחתיכות קטנות. דגרו את הדגימות על מסובב הצינור בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס למשך 30 דקות עד שעתיים, ורשמו את זמן ההתחלה של הדגירה BS3 עבור כל צינור. לאחר מכן, הרוו את התגובה עם 78 מיקרוליטר של גליצין מולארי אחד. דגירה נוספת למשך 10 דקות בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס עם סיבוב קבוע, ורשום את שעת ההתחלה והסיום למרווה.