הערכת ספיגת גלוקוז בתאי העצב המוטוריים של זחלי דרוזופילה עם חילוף חומרים מווסת של גלוקוז

הנח זחלי בקרה ומוטציה של דרוזופילה בכלים נפרדים המכילים בופר נטול גלוקוז.

נתח את הזחלים כדי להסיר איברים פנימיים, תוך חשיפת מערכת העצבים המרכזית או מערכת העצבים המרכזית.

מערכת העצבים המרכזית כוללת חוט עצב גחוני המכיל נוירונים מוטוריים. בזחלים המוטנטיים, נוירונים אלה מציגים חילוף חומרים מוגבר של גלוקוז.

נוירונים מוטוריים בשתי הקבוצות מבטאים חיישני גלוקוז תוך תאיים המכילים פלואורופורים תורמים ומקבלים.

מקם את הזחלים מתחת למיקרוסקופ קונפוקלי. עם עירור, הפלואורופור התורם פולט פלואורסצנטיות.

אתר את הנוירונים המוטוריים באמצעות הקרינה הזו.

החלף את המאגר בתמיסה עם תוספת גלוקוז.

גלוקוז נכנס לתאי העצב, נקשר לחיישנים ומעורר שינוי קונפורמציה שמביא את שני הפלואורופורים לקרבה.

עם עירור, המקבל סופג את האנרגיה הנפלטת מהתורם, המכונה העברת אנרגיית תהודה פלואורסצנטית או FRET, ופולט פלואורסצנטיות.

אות ה-FRET נמצא בקורלציה עם ספיגת הגלוקוז. עוצמת אות מקבל גבוהה יותר בזחלים המוטנטיים בהשוואה לבקרה מצביעה על חילוף חומרים מוגבר של גלוקוז.

לפני תחילת הנתיחות, הפעל את מיקרוסקופ ההדמיה והלייזרים. לאחר מכן, אסוף זחל כוכב שלישי נודד. שוטפים אותו במים מזוקקים כפולים ומניחים אותו בטיפת מאגר HL3 על צלחת מרופדת באלסטומר שהוכנה בעבר.

לאחר מכן, תחת מיקרוסקופ מנתח, השתמש בזוג מלקחיים כדי להצמיד את הקצוות הקדמיים והאחו