צביעה חיסונית של אסטרוציטים בעלי תווית פלואורסצנטית בקטע רקמת מוח של עכבר

קחו קטע קבוע של רקמת מוח של עכבר המכיל אוכלוסייה דלילה של אסטרוציטים המבטאים חלבון פלואורסצנטי.

טפל בחלק הצף החופשי עם מאגר המכיל חומר ניקוי כדי לחלחל לתאים.

דגרו את החלק במאגר חוסם כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

טפל בקטע בנוגדנים ראשוניים ודגר כדי לאפשר לנוגדנים להיקשר לחלבונים הפלואורסצנטיים באסטרוציטים.

שטפו את כל הנוגדנים הראשוניים העודפים באמצעות חוצץ.

לאחר מכן, דגרו את הקטע עם נוגדנים משניים מתויגים פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.

שטפו נוגדנים משניים לא קשורים עם מאגר.

העבירו את החלק לתערובת מים נטולת יונים כדי להסיר שאריות חומרי ניקוי.

הנח את החלק על שקופית המכילה מים נטולי יונים. הסר עודפי נוזלים והוסף אמצעי הרכבה. לאחר מכן, מקם כיסוי ואבטח אותו.

לבסוף, השתמש במיקרוסקופיה קונפוקלית כדי לדמיין את האסטרוציטים המבטאים חלבון פלואורסצנטי בתוך הקטע.

כדי להתחיל, הכינו תמיסה טרייה של TBST על ידי הוספת 1 מיליליטר של 10% טריטון X לצינור של 50 מיליליטר ומילוי הצינור ל -50 מיליליטר ב- TBS. הכן 2 מיליליטר של תמיסות חסימה ונוגדנים לכל מוח על ידי שילוב סרום עיזים ו- TBST בצינור של 15 מיליליטר.

לאחר מכן, סמן צלחת של 24 בארות כדי למקם דגימות שונות בשורות שונות, בתמיסות שונות, בעמודות שונות. לאחר מכן, הוסף 1 מיליליטר של TBST לשלושת העמודות הראשונות המסומנות כ-'Wash 1', 'Wash 2'