JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:10 דק' • July 8th, 2025
קח דיסק בין-חולייתי (IVD), מבנה דמוי כרית הממוקם בין החוליות, מזנב בקר.
מקם אותו אנכית והזריק TNF-α רקומביננטי, ציטוקין פרו-דלקתי, לתוך הגרעין העיסתי (NP), הליבה דמוית הג'ל.
משוך את המזרק באמצע הדרך ומשוך את הבוכנה כדי ליצור ואקום, ומונע זרימה חוזרת של TNF-α. לאחר מכן, הסר את המזרק.
הנח את ה- IVD בתא ביו-ריאקטור המכיל מדיה, והפעל עומס לחץ אינטנסיבי מדי יום.
TNF-α נקשר לקולטנים שלו בתאי NP, ומפעיל מפל איתות.
זה מפעיל קספזות יוזם ותליין, אשר מפרקים חלבונים תאיים וגורמים לאפופטוזיס.
TNF-α מפעיל גם את גורם השעתוק NF-κB, הגורם לביטוי גנים דלקתיים, מה שמוביל לשחרור אנזימים המפרקים את המטריצה החוץ-תאית של ה-IVD.
בנוסף, עומס הלחץ האינטנסיבי גורם ללחץ מכני, ופוגע עוד יותר ב-IVD.
זה מקטין את גובה ה-IVD בהשוואה לבקרות לא מטופלות, ויוצר מודל ניווני ופרו-דלקתי של מחלת IVD בשלב מוקדם.
לאחר מחזור ההעמסה הדינמי הראשון ביום הראשון, הנח ישירות את ה-IVDs בצלחת פטרי במצב אנכי וייצב אותם בעזרת פינצטה. הזרקת TNF אלפא רקומביננטי עם מחט אינסולין בגודל 30, לאט במהירות של כ-70 מיקרוליטר לדקה לתוך ה-IVD של הקבוצה הפתולוגית. לאחר ההזרקה, משוך את המזרק באמצע הדרך לאחור ומשוך את הבוכנה כדי ליצור ואקום המונע מהתמיסה המוזרקת לדלוף. לאחר מכן, הסר את המזרק לחלוטין מה-IVD.