השגת תרחיף של תא בודד מרקמת מוח של חולדה קפואה

הפשירו קטע מרקמת מוח קפואה של חולדות.

מוסיפים חיץ וטוחנים את הרקמה. לאחר מכן, העבירו אותו לצינור המכיל חיץ וערבבו.

צנטריפוגה את התערובת והשליכו את הסופרנטנט.

הוסף תמיסת אנזים פרוטאוליטי לרקמה והשהה אותה מחדש באמצעות פיפטה בקוטר גדול.

דגרו את התערובת כדי לפרק את המטריצה החוץ-תאית, ולשחרר את התאים העצביים.

צנטריפוגה את התערובת והשליכו את הסופרנטנט.

השעו מחדש את שברי הרקמה במאגר מקורר והפעילו אותם שוב ושוב כדי לנתק את התאים.

אפשר לפסולת ולתאים הלא מנותקים להתייצב, ואז העביר את התרחיף החד-תאי לצינור חדש.

מעבירים את התאים לאתנול קר כקרח ומערבבים. דגרו אותם כדי לתקן ולחלחל את התאים.

צנטריפוגה את המתלים והשליכו את הסופרנטנט.

השעו מחדש את התאים העצביים במאגר קר להמשך ניתוח.

כדי לטחון את הרקמה, אפשר לדגימות להפשיר על צלחת זכוכית קרה לא יותר מדקה אחת לפני כיסוי הדגימות בטיפה אחת עד שתיים של תמיסת חיץ A. לאחר מכן, אוחזים בסכין גילוח אנכי לחלוטין לצלחת, טוחנים את הרקמה 100 פעמים בכל כיוון אורתוגונלי. כדי לטחון היטב את הרקמה, חשוב לשמור על הרקמה רטובה עם מאגר A ולעקוב אחר זמני הטחינה והכיוון שצוינו.

זה קריטי להסיר את רוב החומר הלבן במהלך דיסקציה של הרקמה, ולשמור על הרקמה מכוסה במאגר A, כדי לשפר את יעילות הטחינה ולשמור על בריאות התאים.

לאחר עיבוד יסודי של הרקמה, השתמשו בסכין הגילוח כדי להעביר את