קביעת יכולת אגירת הסידן של מיטוכונדריה מבודדת

0 צפיות2:42 דק' • July 8th, 2025

Loading...
$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

הנח את המיטוכונדריה שבודדה מתאי נוירובלסטומה במאגר המכיל צבע פלואורסצנטי אטום לממברנה, קושר סידן.

דגירה כדי לאפשר למיטוכונדריה להתייצב במאגר.

מוסיפים חיץ המכיל סידן ודוגרים בניעור.

יוני הסידן נקשרים למולקולות הצבע, וגורמים לפלואורסצנטיות שלהן.

באמצעות ספקטרומטר פלואורסצנטי, עקוב אחר הקרינה של הצבע בזמן אמת.

כעת, הזרקו חוצץ המכיל סידן במרווחי זמן קבועים.

ריכוז הסידן המוגבר מקדם את ספיגת הסידן המיטוכונדריאלי, ומפחית את יוני הסידן החופשיים הזמינים להיקשר לצבע, מה שמביא לירידה בקרינה.

ברגע שהמיטוכונדריה מגיעים לקיבולת אחסון הסידן המקסימלית שלהם, תוספת סידן נוספת מפעילה את פתיחת נקבובית מעבר החדירות המיטוכונדריאלית (mPTP).

פתח נקבוביות זה משחרר סידן מהמיטוכונדריה לתוך המאגר, שם הוא נקשר לצבע וגורם לפלואורסצנטיות מוגברת.

קבע את כמות הסידן הכוללת הנדרשת כדי לגרום לפתיחת mPTP, המשקפת את יכולת אגירת הסידן המיטוכונדריאלית.

הכן את אמצעי האשלגן הכלורי והוסף את הצבע הפלואורסצנטי הירוק הקושר סידן לריכוז סופי של 0.5 מיקרומולר לפני הניסוי. כדי לקבוע את יכולת שימור הסידן המיטוכונדריאלי, העבירו תחילה 1 מיליליטר של מיטוכונדריה מבודדת במדיה של אשלגן כלורי המכילה 0.5 צבע פלואורסצנטי ירוק קושר סידן מיקרו-מולרי לכל באר של צלחת בת 6 בארות.

דגרו את המיטוכונדריה בצבע הפלואורסצנטי הירוק הקושר סידן בצלחת 6 הבארות בטמפרטורת החדר. הגן עליו מפני אור הסביבה למשך דקה אחת. לאחר הדגירה, הוסף 4 מיקרוליטר של תמיסת סידן כלוריד של 20 מילי-מולרית לכל באר של צלחת 6 הבארות, תוך שימוש בהגדרת החלוקה האוטומטית כדי להכניס 200 ננומול של סידן למיליגרם של חלבון מיטוכונדריאלי.

השתמש בספקטרומטר פלואורסצנטי כדי לנטר את שינויי הקרינה כל שלוש שניות למשך 2 דקות, עם אורך גל עירור של 506 ננומטר ואורך גל פליטה של 531 ננומטר. הצלחת מצוידת בטלטול במהירות של 600 סל"ד למשך 3 שניות בין קריאות, הנשלטת על ידי תוכנה. הוסף תוספת של 4 מיקרוליטר של תמיסת סידן כלוריד של 20 מילי-מולרי לכל באר, ולאחר מכן עקוב אחר שינויי הקרינה כל 3 שניות למשך 2 דקות.

08:43

מדידה בו זמנית של סידן מיטוכונדריאלי מיטוכונדריאלי ממברנה פוטנציאלית בתאים חיים באמצעות פלורסנט מיקרוסקופית

סרטונים קשורים

0 צפיות

08:29

ניתוחים של סידן מיטוכונדריאלי זרם המיטוכונדריה מבודד, תאים בתרבית

סרטונים קשורים

0 צפיות

07:46

הדמיה מיטוכונדריאלית Ca2 + ספיגה אסטרוציטים ונוירונים באמצעות אינדיקטורים Ca2+ מקודדים גנטית (GECIs)

סרטונים קשורים

0 צפיות

09:45

בידוד מיטוכונדריאלי של שריר השלד

סרטונים קשורים

0 צפיות

13:42

מדידת פרמטר-Multi של הפתיחה הנקבובית מעבר החדירות בלב עכבר מבודד המיטוכונדריה

סרטונים קשורים

0 צפיות

03:13

בדיקת ספיגת סידן מיטוכונדריאלי: שיטה מבוססת קורא צלחות למדידת ספיגת סידן במיטוכונדריה מבודדים

סרטונים קשורים

0 צפיות

04:46

בדיקת זרימת סידן למדידת ספיגת סידן מיטוכונדריאלי בתאים בתרבית

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:12

בידוד של המיטוכונדריה מכמויות מינימליות של שרירי שלד עכבר למדידות תפוקה גבוהה microplate נשימה

סרטונים קשורים

0 צפיות

10:25

בידוד של המיטוכונדריה ללא פגע מן שרירי השלד על ידי דיפרנציאל צנטריפוגה מדידות Respirometry ברזולוציה גבוהה

סרטונים קשורים

0 צפיות

05:53

Ca מיטוכונדריאלי2 + שמירה קיבולת Assay ו- Ca2 +-עוררה Assay נפיחות מיטוכונדריאלי

סרטונים קשורים

0 צפיות

עודכן לאחרונה: 15 אוגוסט 2026