אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:13 דק׳ • April 28th, 2025
קח זבוב כהה, מורדם, טרנסגני, בעל עיניים לבנות.
הזבוב מבטא תעלות יונים TRPL מתויגות eGFP בקולטני האור של העין.
בחושך, TRPL מתמקם בממברנות של הרבדומרים - המיקרוווילי של קולטני האור.
באמצעות אוויר דחוס, דחף את הזבוב עם הראש לתוך קצה פיפטה.
חתוך את הקצה ודחף את הזבוב לאחור.
חתוך אותו שוב ודחף את הזבוב קדימה עד שרק ראשו בולט.
לשתק את הקצה בחימר מודלים המודבק לשקופית והנח אותו על שלב מיקרוסקופ פלואורסצנטי, כאשר העין פונה לאובייקט המיקרוסקופ באופן רדיאלי.
הוסף טיפת מים לאובייקט, ואז הורד אותה עד שהיא נוגעת בעין.
צלם תמונות של קולטני האור.
מדוד את עוצמות הקרינה ברבדומרים, בגוף התא וברקע.
האר את הזבוב באור כתום כדי לגרום לטרנסלוקציה של TRPL לגוף התא.
חזור על מדידות ההדמיה והפלואורסצנטיות.
השווה את התמונות כדי לצפות בפלואורסצנציה מופחתת של רבדומרל לאחר תאורה, מה שמצביע על טרנסלוקציה של TRPL לגוף התא.
כדי להכין זבוב בווריאציה לא קטלנית, העבירו את הזבוב המורדם בקרח עם הראש לקצה פיפטה של 200 מיקרוליטר, ודחפו בזהירות את הזבוב לכיוון הקצה עם אוויר דחוס. לאחר מכן, בעזרת אזמל, חתכו את קצה הפיפטה ממש מול הראש. ובעזרת פינצטה, דחף בזהירות את הזבוב כמה מילימטרים לקצה הפיפטה.
חותכים שוב את קצה הפיפטה. ודחף את הזבוב לאחור לכיוון הקצה עם האוויר הדחוס, כך שרק ראש הזבוב בולט מקצה הפיפטה. לאחר הדבקת חתיכת פלסטלינה על
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים