יצירת מודל ספרואיד תלת מימדי של פלישת תאי גידול

קח תרבית של תאי גידול מוח אנושיים.

טפל באנזים דיסוציאציה כדי לשבש את צמתי התאים, להפריד תאים מצטברים.

שטפו עם חוצץ כדי לעצור את פעילות האנזים, ולאחר מכן הוסיפו מדיום תרבית כדי לשמור על כדאיות התא.

הציגו מתיל צלולוז, חומר מרחיף.

מעבירים את המתלה למיקרופלייט תחתון עגול ומדגרים.

המתיל צלולוז הצמיג שומר על התאים תלויים, ומקדם אינטראקציות תא-תא לצבירה לספרואידים.

מערבבים את הספרואידים עם מטריצת קולגן המחקה את הסביבה החוץ-תאית הפיזיולוגית.

העבירו את המתלה למיקרו-פלטה ודגרו, מה שמאפשר למטריצה ליצור ג'ל הלוכד את הספרואידים.

הוסף את מצע הגידול על גבי הג'ל.

בפריפריה הספרואידית, תאי הגידול מאבדים הידבקות של תאי תא ומאמצים פנוטיפ פולשני.

תאים אלה מפרישים פרוטאזות כדי לפגוע במטריצה, להאריך בליטות כדי לעגן את עצמן, ולנוע קדימה ולפלוש למטריצה.

המודל הספרואיד המציג פלישת גידול מוכן לניתוח.

כדי ליצור ספרואידים גידוליים בגודל אחיד, יש לשטוף תחילה את תרבית תאי הגידול המעניינת עם 5 מיליליטר PBS, ולטפל בתאים עם 0.5 עד 1 מיליליטר של אנזים דיסוציאציה. לאחר 5 דקות בטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס, עצרו את התגובה עם 4 עד 4.5 מיליליטר PBS, והעבירו את התאים המנותקים לצינור חרוטי של 15 מיליליטר, המכיל 10 מיליליטר של מדיום גידול שלם.

לאחר הספירה יש להשהות מחדש את התאים ב-1 כפול 10 עד 6 תאים לכל 8 מיליליטר של מצע גידול מלא, בת