הדמיה מבוססת אימונוציטוכימיה להמחשת נדידת תאי גליומה בילדים

התחל עם צלחת מרובת בארות עם תחתית שטוחה המצופה במטריצת קרום מרתף, המכילה פולימר חוץ-תאי וחלבוני הידבקות המחקים את מטריצת המיקרו-סביבה של הגידול.

הציגו מדיה המכילה נוירוספירה של תאי גליומה שמקורם בגידול מוח של ילדים, וודא שהיא ממוקמת במרכז הבאר.

המטריצה מקדמת את ההתקשרות הנוירוספירית לבאר.

הוסף מגיב מדכא רקע כדי למזער פלואורסצנטיות לא ספציפית.

לאחר מכן, הכנס נוגדנים ירוקים נגד CD44 מצומדים פלואורופור.

העבר את הלוח למערכת הדמיה של תאים חיים השוכנת בתוך אינקובטור השומרת על התנאים הפיזיולוגיים של התא.

עם הזמן, תאי גליומה מבטאים את חלבון ההידבקות התאית CD44, המקיים אינטראקציה עם חלבוני ההדבקה.

זה מפעיל את מסלול האיתות של התא ומקל על נדידת התאים מהנוירוספירה.

הנוגדנים נגד CD44 המצומדים על ידי פלואורופור נקשרים ל-CD44 המבוטא על תאי הגליומה, מה שהופך אותם לפלואורסצות.

הופעתם של תאים פלואורסצנטיים ירוקים המתרחקים מהנוירוספירה מאשרת את נדידת תאי הגליומה.

לאחר שהבארות מצופות ב-BMM, חותכים קצה P200. קח 50 מיקרוליטר ממדיום התא ו- NS מכל באר שנבחרה, והעביר אותו לבאר מצופה ושטוחה ותחתונה. בדוק את הנוכחות והמיקום של ה-NS בכל באר באופן ויזואלי. הוסף בעדינות 50 מיקרוליטר של נוגדן BSR ו-ALR המדולל לכל באר, והמתן שתיים עד שלוש דקות כדי לתת לריאגנטים להתערבב. ובאמצעות מיקרוסקופ הפוך, ודא שרוב ה-NS המשוכפל ממוקם במרכז הבאר. לאחר שווידאת היעדר בועה כלשהי, העבירו בעדינות את הצלחת במכשיר ניתוח התאים החיים כפי שהודגם קודם לכן.

בתוכנת מכשיר ניתוח התאים החיים, בחר באפשרות תזמן לרכישה. לאחר מכן, לחץ על לשונית הפלוס ובחר סרוק לפי לוח זמנים כדי לסרוק את הלוחות במרווחים כפי שהוזכר בכתב היד הטקסט. בחלון התוכנה, צור או שחזר כלי ולאחר מכן לחץ על האפשרות חדש. בחר סוג סריקת שיבוט דילול, יעד פי 4 ושלב וירוק עבור בדיקת ההעברה. בחר את סוג הלוח והגדר את הבארות לסריקה על ידי הדגשתן במפת הלוחות. לאחר מכן, הגדר את תדירות הסריקה. לחץ על הוסף ללוח הזמנים והתחל את הסריקה.