בדיקת פגוציטוזיס של תאים חיים של תאים דמויי מיקרוגליה באמצעות סינפטוזומים אנושיים

קח צלחת מרובת בארות המכילה תאים דמויי מיקרוגליה המציגים פעילות פגוציטית.

דגירה עם כתם גרעיני לסימון גרעינים.

הוסף מעכב פילמור אקטין לבאר הבקרה השלילית.

במהלך הדגירה, המעכב נקשר לחוטי אקטין, ומעכב פילמור אקטין ופגוציטוזיס.

שמור על הצלחת בטמפרטורות נמוכות והוסף סינפטוזומים אנושיים רגישים ל-pH עם תווית צבע - שברים מבודדים של מסופים סינפטיים עצביים.

צנטריפוגה של הצלחת בטמפרטורות נמוכות כדי לקדם אינטראקציות בין תאים לסינפטוזומים אך למנוע קליטה מוקדמת.

העבר את הלוח למערכת הדמיה של תאים חיים.

בבאר הבדיקה, סינפטוזומים עוברים פגוציטוז ומתמזגים עם ליזוזומים היוצרים פגוליזוזומים. הסביבה החומצית הליזוזומלית מפעילה את הצבע, וכתוצאה מכך הקרינה שלו.

עם הזמן, בבאר הבדיקה, יותר סינפטוזומים נבלעים וגורמים לעלייה נוספת בפלואורסצנטיות.

עם זאת, בבאר הבקרה השלילית, פילמור אקטין מעוכב, ומונע קליטת סינפטוזומים. הקרינה המינימלית המתקבלת מאשרת את תלות הקרינה בפגוציטוזיס בתיווך אקטין.

ביום הבדיקה, הסר 40 מיקרוליטר של מדיום לבאר, והוסף 10 מיקרוליטר מתמיסת הצביעה הגרעינית. דגרו את הצלחת למשך שעתיים. הפשירו את הסינפטוזומים המסומנים על קרח ועשו סוניקטור בעדינות באמצעות סוניקטור מים למשך דקה אחת. שוב, הניחו מיד את הסינפטוזומים על קרח. יש לדלל את הסינפטוזומים המסומנים ואת המדיום השלם IMG ב-1 מיקרוליטר סינפטוזומים לכל 50 מי