אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:06 דק׳ • April 28th, 2025
קח רשתית קבועה כימית שבודדה מעין של חולדה.
העין מציגה נזק הנגרם מחום למקלעת כלי הדם הלימבלית, רשת כלי דם המקיפה את הקרנית.
נזק זה חוסם את ניקוז הנוזלים, מגביר את הלחץ התוך עיני (IOP) וגורם לניוון תאי גנגליון ברשתית (RGC).
טפל ברשתית בתמיסת חדירה כדי לחלחל את התא ואת ממברנות הגרעין.
החל תמיסת חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפית.
הסר את פתרון החסימה.
הציגו נוגדנים ראשוניים המכוונים לגורם שעתוק המתבטא בעיקר ב-RGCs.
שטפו כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
הציגו נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
שטפו כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.
צבע נגד הגרעינים בצבע קושר DNA.
שטפו את הרשתית והרכיבו אותה על מגלשת זכוכית באמצעות אמצעי הרכבה מתאים.
דמיין את הרשתית תחת מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי.
צפיפות תאים מופחתת בעין הפגועה בהשוואה לבקרה מאשרת ניוון RGC עקב עלייה ב-IOP.
לאחר בידוד הרשתית, העבירו אותן לתוך צלחת תרבית של 24 בארות המכילה 1 מיליליטר PBS, תוך שמירה על הרשתית הפנימית כלפי מעלה. לחלחל את הרקמה על ידי שטיפה עם חומר פעילי שטח לא יוני 0.5% מדולל ב-PBS. לאחר מכן, דגרו את הרקמה בתמיסה חוסמת למשך שעה בטמפרטורת החדר עם ניעור עדין. במהלך הדגירה יש להכין תמיסת נוגדנים ראשונית BRM 3A ולאחסן בטמפרטורה של 4 מעלות צלזיוס.
לאחר חסימת רקמות, יש לדגור על הרשתית ב-200 מיקרוליטר של תמיסת נוגדנים ראשו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים