הערכת רמות נוירוטרנסמיטורים מעוררים בחולדות הנגרמות על ידי אפילפסיה כרונית

קח חולדת ביקורת וחולדה הנגרמת על ידי אפילפסיה כרונית שהושתלה בצינורית מנחה ואלקטרודה אלקטרואנצפלוגרמה, או EEG, בהיפוקמפוס.

השראת אפילפסיה מגבירה את שחרור המוליכים העצביים המעוררים, וגורמת לזרם יונים לתאים פוסט-סינפטיים, מה שיוצר פוטנציאל מעורר מתמשך. זה מוביל להתפרצויות מסונכרנות של פעילות חשמלית, שנקראות התקפים, שנרשמות באמצעות האלקטרודה.

הכנס בדיקת מיקרודיאליזה עם קרום חדיר למחצה לתוך הצינורית.

קשר את החולדה לכלוב של מערכת הקלטת EEG.

להחדיר חיץ פיזיולוגי לרקמת המוח דרך כניסת הבדיקה.

ודא היעדר התקף ואסוף נוזל חוץ-תאי דרך יציאת הבדיקה כדי להעריך את רמות המוליכים העצביים.

רמת בסיס מוגברת בחולדה אפילפטית מצביעה על עלייה בתיווך אפילפסיה.

להחדיר מאגר אשלגן גבוה ולאסוף דגימות.

האשלגן המוגבר מאריך את הריגוש העצבי, וגורם לשחרור נוירוטרנסמיטורים מתמשך.

עלייה זמנית ברמות המוליכים העצביים הן בחולדות האפילפטיות והן בקבוצת הביקורת מצביעה על עלייה גבוהה הנגרמת על ידי אשלגן.

התחל בהכנת בדיקות המיקרודיאליזה לשימוש הראשון על פי מדריך היצרן למשתמש ומלא אותן בתמיסת רינגר. לאחר מכן, חתוך חתיכות באורך 10 סנטימטרים של צינורות FEP, וחבר אותן לצינוריות הכניסה והיציאה של הגשושית, באמצעות מתאמי הצינורות בצבעים שונים. ודא שהצינור נוגע במתאמים ללא שטח מת בכל החיבורים.

הסר את צינורית הדמה מהמדריך שלה באמצעות הפינצטה על ידי החזקת ראש החיה בחוזקה. הכנס את בדיקת המיקרודיאליזה לתוך צינורית המנחה, והשתמש בחימר דוגמנות כדי למצק עוד יותר את הצינורית. לאחר מכן, חבר את החיה למערכת הקלטת EEG קשורה. לאחר מכן הכניסו את החיה לגליל הפרספקס ותנו לה לחקור את הסביבה החדשה. עקוב אחר תנועות החולדה הערות והנעות בחופשיות.

לאחר מכן, חבר את כניסת הגשושית למזרק 2.5 מיליליטר בעזרת מחט קהה בגודל 22 המכילה את תמיסת הצלצול באמצעות מתאמי הצינורות. דחף מיליליטר אחד של תמיסת צלצול לתוך הגשושית תוך 10 שניות על ידי דחיפה רציפה של הבוכנה של מזרק 2.5 מיליליטר. בדוק אם טיפת הנוזל מופיעה על השקע כדי לסמן מתי הגשושית מוכנה לשימוש. לבסוף, מלאו את מזרקי ה-2.5 מיליליטר המחוברים לצינורות FEP על ידי מתאמי צינורות בתמיסת הצלצול והרכיבו אותם על משאבת העירוי. הפעל את המשאבה בשני מיקרוליטר לדקה ותן לה לפעול למשך הלילה.

לאחר אימות באמצעות הקלטות EEG בווידאו, היעדר התקפים בשלוש השעות שקדמו לאיסוף הדגימה, עצור את המשאבה הנושאת את צינורות ה-FEP מזרקים מלאים בתמיסת רינגר. הרכיבו סט נוסף של מזרקים של 2.5 מיליליטר המחוברים לצינורות FEP עם מתאמי צינורות מלאים בתמיסת צלצול שונה המכילה תמיסת אשלגן של 100 מילי-מולרי. הפעל את המשאבה במהירות של 2 מיקרוליטר לדקה ותן לה לפעול. בדוק אם אין בועות אוויר במערכת, וודא שהצינור נוגע במתאמים ללא שטח מת בכל החיבורים.

לאחר מכן, בדוק אם טיפת הנוזל מופיעה על השקע כדי לסמן מתי הגשושית מוכנה לשימוש. לאחר מכן, חבר את צינור ה- FEP של מזרקים מלאים בתמיסת צלצול לצינורית הכניסה של הגשושית בכל בעל חיים, והמתן להופעת טיפת הנוזל בקצה השקע. חבר את שקע הגשושית לצינור ה- FEP, מה שמוביל לאיסוף במבחנה.

הכנס את צינור ה-FEP למבחנה הסגורה של 0.2 מיליליטר עם מכסה מחורר. וודא שהצינור יישאר במקומו על ידי קיבועו עם חתיכת חימר דוגמנות. לאחר הפעלת המשאבה במהירות של 2 מיקרוליטר לדקה למשך 60 דקות מבלי לאסוף דגימות לשיווי משקל, המערכת אוספת חמש דגימות דיאליזה רצופות של 30 דקות בתנאי בסיס. ואחסן דוגמאות על קרח.

לאחר 10 דקות, העבירו את הצינור מהמזרקים המכילים תמיסת צלצול אשלגן 100 מילי-מולרית לתמיסת צלצול רגילה ותנו למשאבה לפעול. לאחר איסוף הדיאליזה החמישית לאחר שיווי המשקל, אסוף 20 שברי דיאליזה מיקרוליטר כל 10 דקות למשך שעה. לאחר מכן אספו שלוש דגימות דיאליזה נוספות של 30 דקות ועצרו את המשאבה. לבסוף, אחסן את הדגימות במינוס 80 מעלות צלזיוס לאחר הניסוי עד לניתוח HPLC.