השפעת מחסור בחמצן-גלוקוז וחמצון מחדש על אינטראקציות תא-תא

קח שקופית תא עם תרבית חד-שכבתית של תאי אנדותל מיקרו-וסקולריים במוח חולדה, או RBMECs.

התאים מחוברים על ידי חלבוני צומת הדוקים המקושרים לשלד הציטו של האקטין, ומחקים את שכבת האנדותל של מחסום הדם-מוח.

החלף את המדיום במדיום נטול גלוקוז לא מחומצן, ולאחר מכן הנח את השקופית בתא היפוקסיה.

חוסר הזמינות של חמצן וגלוקוז מעכב את סינתזת ה-ATP. ה-ATP הנותר מתפרק לנגזרות נוקלאוטידים.

דלדול ATP מעכב את משאבות הסידן, ומעלה סידן תוך תאי המפעיל אנזימי אוקסידורדוקטאז.

לאחר מכן, מלאו במדיום מחומצן, ואז הניחו את השקופית באינקובטור מחומצן. החמצונים המופעלים מנצלים את החמצן שהוכנס מחדש כדי לפרק את נגזרות הנוקלאוטיד, וליצור מיני חמצן תגובתיים או ROS.

ROS משבש את האינטראקציות בין חלבוני צומת הדוקים וגורם למסלולי איתות המעצבים מחדש את השלד הציטולוגי של האקטין לסיבי לחץ, ומחלישים אינטראקציות תא-תא.

החד-שכבתי עם אינטראקציות בין-תאיות משובשות מוכן לניתוח.

כהכנה יש להקים ולכייל את מערכת תרבית תאי ההיפוקסיה בהתאם להוראות היצרן. סביבת החדר צריכה להיות 95% חנקן, 5% פחמן דו חמצני ובטמפרטורה של 37 מעלות צלזיוס. כעת, דה-חמצן dmem נטול גלוקוז על ידי הנחתו בתא ההיפוקסיה למשך 4 עד 6 שעות. מאוחר יותר, התחל להלחיץ את התאים על ידי החלפת המדיום שלהם ב-DEM נטול גלוקוז נטול מחומצן. ואז מכניסים את התאים לתא ההיפוקסיה למשך שעתיים. לאחר שעתיים, החזירו את התאים למדיום השלם של תאי האנדותל של מוח העכברוש. לאחר מכן, חמצנו מחדש את התאים על ידי החזרתם לתנאים רגילים למשך שעה.