אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 7:03 דק׳ • April 28th, 2025
קח תאי נוירוספרה במאגר המכיל חומרי ניקוי, סידן ומעכבי פרוטאז.
חומר הניקוי מחלחל לתאים, בעוד שהמעכב מנטרל פרוטאזות כדי לשמר את חלבון המטרה הקשור לכרומטין.
מוסיפים נוקלאז ודוגרים. הנוקלאז משתמש בסידן כדי לעכל את הכרומטין.
הוסף מאגר המכיל EDTA שמכיל סידן, ומנטרל את הנוקלאז.
הוסף מאגר ליזה כדי ליז את התאים, ולשחרר את הכרומטין.
צנטריפוגה ולאסוף את הסופרנטנט.
הוסיפו נוגדנים ספציפיים לחלבון המטרה ודגרו בסיבוב. צנטריפוגה והסר את הסופרנטנט.
הכניסו חרוזים מגנטיים המכוונים לנוגדנים ודגרו בסיבוב.
הוסף מאגר ליזה כדי להפריד DNA שאינו קשור במיוחד.
לכוד את החרוזים באופן מגנטי והסר את הסופרנטנט.
הוסף חוצץ עתיר מלח כדי להפריד חלבונים שאינם קשורים ספציפית.
לכוד את החרוזים באופן מגנטי והסר את הסופרנטנט.
הוסף מאגר ייצוב, לכוד מגנטית את החרוזים והסר את המזהמים.
השעו מחדש במאגר חלבון-K כדי לעכל את החלבונים, ולשחרר את ה-DNA.
לאחר איסוף הנוירוספרות, צנטריפוגה 1 כפול 10 ל-6 תאי הנוירוספרה לכל משקעים חיסוניים ב-300 פעמים g למשך 5 דקות. לאחר הצנטריפוגה, שפכו את הסופרנטנט ותלו מחדש את כדור הנוירוספירה במיליליטר אחד של תמיסת מלח מאוזנת. העבירו את התרחיף לצינורות מיקרו-צנטריפוגה נמוכים של 1.5 מיליליטר ואז צנטריפוגה כמו קודם.
לאחר מכן, יש לשפוך את ה-supernatant ולהשעות מחדש את כדור התא ב-95 מיקרוליטר של מאגר עיכול בתוספת 1 עד
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים