ביצוע הכלאה של פלואורסצנציה כפולה באתרה לאיתור ביטוי גנים במקטעי מוח של עכבר

קחו קטע מוח של עכבר קבוע כימית.

הוסף תערובת הכלאה המכילה חומר חדירות ובדיקות RNA המסומנות ב-FITC או DIG.

דגירה כדי לאפשר חדירת תאים וכניסת בדיקה.

הבדיקות נקשרות לרצפים משלימים ב-MBP mRNA, סמן ייחוס המתבטא בכל מקום באוליגודנדרוציטים, או ASPA mRNA, המטרה.

שטפו כדי להסיר בדיקות לא קשורות.

הוסף מאגר חוסם כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הציגו נוגדנים נגד FITC מצומדים ל-HRP המכוונים לבדיקה המסומנת על ידי FITC.

שוטפים ואז מוסיפים FITC-טירמיד.

HRP מחמצן FITC-טירמיד לצורה תגובתית מאוד הנקשרת לחלבונים סמוכים, ומגבירה את אות הקרינה.

שטפו והכניסו מחדש את המאגר החוסם.

הוסף נוגדנים נגד DIG מצומדים לפוספטאז אלקליין המכוונים לבדיקה המסומנת ב-DIG.

שוטפים ומורחים את התמיסה האדומה המהירה.

פוספטאז אלקליין דפוספורילטים אדום מהיר, ומייצר משקעים פלואורסצנטיים.

דמיין תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

לוקליזציה משותפת של אותות Mbp ו-ASPA מצביעה על ביטוי ASPA באוליגודנדרוציטים.

מדללים את שני הגשושיות במאגר הכלאה, מחומם מראש ל-65 מעלות צלזיוס, ומערבבים היטב. מרחו 300 מיקרוליטר של תערובת הכלאה על כל שקופית, וכסו בכיסוי אפוי בתנור. לאחר מכן, דגרו את המגלשות למשך הלילה בטמפרטורה של 65 מעלות צלזיוס בתא לח.

למחרת, העבירו את המגלשות לצנצנת קופלין המכילה מאגר כביסה מחומם מראש, ושטפו את המגלשות במשך 30 דקות, פעמיים בחום של 65 מעלות