צביעה אימונופלואורסצנטית של רקמה פיברווסקולרית חולה שמקורה בחולה משובצת בג'ל

קח רקמת פיברין חולה משובצת בג'ל מיובש, קבועה וחדירה שמקורה בחולה. רקמה זו מכילה מבנים ניאו-וסקולריים לא סדירים עם תאי אנדותל ופריציטים.

טפל ברקמה בתמיסה חוסמת למניעת קשירת נוגדנים לא ספציפית.

דגירה עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבוני פני השטח על תאי אנדותל ופריציטים.

יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים לא קשורים, ולאחר מכן לדגור במאגר.

לאחר שטיפת חיץ, יש לדגור עם נוגדנים משניים מצומדים בצבע פלואורסצנטי כדי להיקשר לנוגדנים הראשוניים.

יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר עודפי נוגדנים ולדגור במאגר.

לאחר שטיפת המאגר, הוסף צבע גרעיני כדי להכתים את גרעיני התאים. יש לשטוף עם חוצץ ומים נטולי יונים כדי להסיר צבע לא קשור.

העבירו את הרקמה לשקופית מיקרוסקופ.

החל מדיית הרכבה ואטום עם כיסוי המכיל מדיית הרכבה מתקשה במהירות.

לאחר ייבוש באוויר, אחסן את המגלשה בטמפרטורה נמוכה. לאחר מכן, דמיין את הרקמה תחת מיקרוסקופ אפיפלואורסצנטי כדי לדמיין את הסידור המרחבי של תאי אנדותל ופריציטים בתוך המבנים הניאו-וסקולריים.

הטה את הצלחת על תומך ודגר את הטיפות ב-500 מיקרוליטר של תמיסת חסימה למשך שעתיים בטמפרטורת החדר. הכן את תערובת הנוגדנים העיקרית בהתאם לפרוטוקול הטקסט.

לאחר מכן השתמש במרית עם קצוות עגולים כדי להעביר את הטיפות לצלחת תחתונה עגולה של 96 בארות. דגרו את הטיפות ב-30 מיקרוליטר של תערובת נוגדנים ראשונית לכל טיפה למשך הלילה