הערכת שלמות מחסום הדם-מוח במודל של חולדות פגיעה מוחית הנגרמת על ידי לייזר

קחו חולדת ביקורת מורדמת ומודל חולדה עם פגיעה מוחית המושרה על ידי לייזר.

יישום הלייזר על ההמיספרה הימנית פגע בתאים ובמחסום הדם-מוח, או BBB, המפריד בין דם לרקמת המוח.

הזרקת צבע מעקב לווריד הזנב הקנולטורי שעובר דרך מחזור הדם המערכתי כדי להגיע למוח.

הצבע נקשר לחלבוני פלזמה ודולף לרקמת המוח דרך ה-BBB הפגוע.

המתת חסד של החולדות.

החדרת החולדות דרך הלב כדי לנקות את הצבע ממחזור הדם.

חלץ וחתוך את המוח, בודד את הפרוסות מחצי הכדור הפגוע והומוגני אותן.

טפל בתמיסה חומצית כדי לנטורל חלבונים, ולשחרר את הצבע הקשור לחלבון.

צנטריפוגה ולבודד את הסופרנטנט המכיל צבע. הוסף אלכוהול כדי לשפר את פלואורסצנטיות הצבע.

העבר את הפתרון למיקרו-לוח. בעת עירור, עוצמת פלואורסצנטיות גבוהה יותר במוח הפגוע מצביעה על נזק ל-BBB המושרה על ידי לייזר.

כדי להעריך את השכיחות של שבירת מחסום דם-מוח, 24 שעות לאחר הפגיעה הנגרמת בלייזר, טען מזרק עם 2% צבע כחול אוונס, מדולל ב-4 מיליליטר לק"ג תמיסת מלח, והעביר את התמיסה תוך ורידי לחולדות הפצועות והביקורת דרך וריד הזנב הקנולטי.

אפשר לתמיסה להסתובב במשך שעה, לפני השימוש בערכות סיכות כירורגיות ומספריים לפתיחת החזה של החיה הראשונה. לחלחל את הלב החשוף, עם תמיסת מלח מקוררת של 0.9% דרך החדר השמאלי בלחץ של 110 מילימטר כספית, עד שנצפה נוזל זלוף חסר צבע מהפרוזדור הימני.

לאחר מכן, קצרו את המוח, והשיגו פרוסות רוסטרוקאודליות בגודל 2 מילימטר. הפרד את פרוסות המוח השמאלי מפרוסות המוח הימני כדי לאפשר הערכה של ההמיספרות הפגועות והלא פגועות בנפרד, ושקול את הדגימות. הומוגניזציה של הדגימות, באמצעות מכתש ועלי, ודגירה של דגימות הרקמה ב-50% חומצה טריכלורואצטית למשך 24 שעות.

למחרת, צנטריפוגה את דגימות רקמת המוח ההומוגניות, למשך 20 דקות בטמפרטורה של פי 10,000 גרם וטמפרטורת החדר. מערבבים 1 מיליליטר של הסופרנטנט עם 1.5 מיליליטר של 96% אתנול ביחס של 1 עד 3. לאחר מכן, השתמש בגלאי פלואורסצנטי בעירור של 620 ננומטר ובאורך גל פליטה של 680 ננומטר כדי להעריך את שבירת מחסום הדם-מוח.