ביצוע אימונוהיסטוכימיה על רקמת מוח של פרימטים שאינם אנושיים

התחילו עם קטע מוח של פרימטים לא אנושיים קבועים כימית.

הקיבוע המבוסס על אלדהיד מקשר חלבונים, שומר על מבנה הרקמה, אך משאיר כמה שאריות אלדהיד תגובתיות.

שטפו כדי להסיר את שכבת ההקפאה המקיפה את קטע הרקמה.

הוסף חומר הפחתה כדי לנטרל את קבוצות האלדהיד התגובתיות, ולייצר תוצרי לוואי של תגובה.

שטפו כדי להסיר את תוצרי הלוואי הללו וחומרים מפחיתים עודפים.

יש למרוח תמיסת חסימה כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפיים.

הוסף נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבון המתבטא באתרים ספציפיים בקרום העצבי.

שטפו כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

הוסף נוגדנים משניים ביוטיניליים המכוונים לנוגדנים העיקריים.

שטפו כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

שכבו קומפלקסים של אבידין-ביוטין-פרוקסידאז הנקשרים לנוגדנים המשניים.

שטפו שוב כדי להסיר קומפלקסים לא קשורים.

הציגו מצע כרומוגני יחד עם מי חמצן. בנוכחות מי חמצן, האנזים פרוקסידאז מחמצן את המצע ויוצר משקעים חומים.

התחל בהעברת מקטעים בעובי 50 מיקרון של מוח פרימט מקובע של אקרולאין, המכילים את אזור העניין לצלחת בת 12 בארות המכילה PBS. שטפו את החלקים הצפים החופשיים שלוש פעמים ב-PBS למשך חמש דקות בטמפרטורת החדר. לאחר מכן דגרו את החלקים בתמיסת נתרן בורוהידריד טרייה שהוכנה למשך 30 דקות בטמפרטורת החדר. נדנד בעדינות ללא כיסוי.

לאחר שחלפו 30 הדקות, שאפו את הנתרן בורוהידריד והוסיפו PBS לכל באר. מניחים את הצלחת על