אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:59 דק׳ • April 28th, 2025
קח שקופית המכילה הקפאת רקמת קורונל של חולדה קבועה וחדירה.
מתאר את החלקים בעזרת עט הידרופובי כדי ליצור סביבת צביעה מבוקרת.
העבירו את החלקים לתא לחות כדי למנוע ייבוש של ריאגנטים ורקמות במהלך השלבים הבאים.
טפל בקטעים בחלבוני סרום כדי לחסום אתרי קישור לא ספציפיים.
יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר עודפי חלבונים בסרום.
דגירה עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבונים ספציפיים על מיקרוגליה ונוירונים.
יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים ראשוניים לא קשורים.
דגירה עם נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.
יש לשטוף עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים משניים לא קשורים. לאחר מכן, שטפו במים מזוקקים פעמיים.
החל מדיית הרכבה מימית כדי להגן על אות הפלורסנט, הנח כיסוי ואטום אותו.
דמיין את החלקים תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לדמיין מיקרוגליה ונוירונים עם תווית חיסונית.
יבש את קצוות השקופיות, וצור גבול דוחה נוזלים סביב קצה השקף בעזרת עט פאפ, כדי להבטיח כיסוי אחיד של הנוזל ולהפחית את אפקטי הקצוות. לאחר מכן, חסום את החלקים על ידי הוספת 300 מיקרוליטר סרום ב-PBS לכל שקופית. הסרום, צריך להיות מהמין בו גדל הנוגדן המשני. במקרה זה נעשה שימוש בסרום חמורים.
ודא שתמיסת החסימה משתרעת עד קצה השקופית ומכסה לחלוטין את הרקמה כדי למנוע כתמים לא אחידים. הנח את המגלשות בתא לחות לדגירה בטמפרטורת החדר, למשך שעה. במהלך הדגירה, הכינו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים