צביעה אימונוהיסטוכימית של סמנים ביולוגיים בקטעי נוירוספירה של גידול מוח

קח שקופית עם קטעים משובצים בפרפין של נוירוספרות של גידול במוח, אשכולות של תאי גזע עצביים המציגים סמנים ביולוגיים של חלבון גרעיני ספציפי לגידול.

מחממים כדי להמיס פרפין, מסירים אותו באמצעות קסילן ומחזירים לחות לרקמה באמצעות ירידה בריכוזי האלכוהול.

מחממים במאגר חומצי המכיל חומר ניקוי כדי לחשוף אפיטופים על הסמנים הביולוגיים ולחלחל לממברנות התאים.

שטוף, ולאחר מכן טפל בחומר מחמצן כדי לנטרל אנזימי פרוקסידאז אנדוגניים, ולמנוע אותות לא ספציפיים.

החל פתרון חסימה כדי להסוות אתרי כריכה לא ספציפיים.

דגירה עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לאפיטופים של הסמנים הביולוגיים.

שטפו, ולאחר מכן טפלו בנוגדנים משניים מצומדים לביוטין הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.

שטפו ודגרו עם אבידין מצומד לאנזים פרוקסידאז, שנקשר לביוטין.

הוסף מצע כרומוגני וחומר מחמצן.

Peroxidase משתמש בחומר כדי להמיר את המצע למשקעים צבעוניים, ולסמן את מיקום הסמן הביולוגי.

צבוע נגד הגרעינים, יבש את הרקמה באלכוהול והתקן את השקופית להדמיית התפלגות הסמנים הביולוגיים.

ראשית, ממיסים את הפרפין על ידי דגירה של השקופיות ברשת מתכת בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. לאחר מכן הפחתת המגלשות באמצעות דגירה ברכבת החזרת נוזלים בטמפרטורת החדר על פי פרוטוקול טקס. אחסן את השקופיות במי ברז כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפית. לאחר מכן, דגרו את המגלשות במאגר ציטראט ב-1