צביעה אימונוהיסטוכימית של סמנים ביולוגיים בקטעי נוירוספירה של גידול מוח

קח שקופית עם קטעים משובצים בפרפין של נוירוספרות של גידול במוח, אשכולות של תאי גזע עצביים המציגים סמנים ביולוגיים של חלבון גרעיני ספציפי לגידול.

מחממים כדי להמיס פרפין, מסירים אותו באמצעות קסילן ומחזירים לחות לרקמה באמצעות ירידה בריכוזי האלכוהול.

מחממים במאגר חומצי המכיל חומר ניקוי כדי לחשוף אפיטופים על הסמנים הביולוגיים ולחלחל לממברנות התאים.

שטוף, ולאחר מכן טפל בחומר מחמצן כדי לנטרל אנזימי פרוקסידאז אנדוגניים, ולמנוע אותות לא ספציפיים.

החל פתרון חסימה כדי להסוות אתרי כריכה לא ספציפיים.

דגירה עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לאפיטופים של הסמנים הביולוגיים.

שטפו, ולאחר מכן טפלו בנוגדנים משניים מצומדים לביוטין הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.

שטפו ודגרו עם אבידין מצומד לאנזים פרוקסידאז, שנקשר לביוטין.

הוסף מצע כרומוגני וחומר מחמצן.

Peroxidase משתמש בחומר כדי להמיר את המצע למשקעים צבעוניים, ולסמן את מיקום הסמן הביולוגי.

צבוע נגד הגרעינים, יבש את הרקמה באלכוהול והתקן את השקופית להדמיית התפלגות הסמנים הביולוגיים.

ראשית, ממיסים את הפרפין על ידי דגירה של השקופיות ברשת מתכת בטמפרטורה של 60 מעלות צלזיוס למשך 20 דקות. לאחר מכן הפחתת המגלשות באמצעות דגירה ברכבת החזרת נוזלים בטמפרטורת החדר על פי פרוטוקול טקס. אחסן את השקופיות במי ברז כדי למנוע קשירת נוגדנים לא ספציפית. לאחר מכן, דגרו את המגלשות במאגר ציטראט ב-125 מעלות צלזיוס למשך 30 שניות ב-90 מעלות צלזיוס למשך 10 שניות. הניחו למגלשות להתקרר לפני ששטפו אותן חמש פעמים במים מזוקקים.

לאחר מכן, דגרו את המגלשות בטמפרטורת החדר במי חמצן של 0.3% למשך 20 דקות. לאחר מכן, שטפו את השקופיות במשך חמש דקות שלוש פעמים במאגר כביסה עם תסיסה עדינה. דגרו את המגלשות למשך הלילה בתא לח המוגדר ל-4 מעלות צלזיוס עם נוגדן ראשוני מדולל. לאחר מכן יש לשטוף את השקופיות שלוש פעמים למשך חמש דקות בתסיסה עדינה.

לאחר מכן, דגרו את השקופיות בנוגדנים משניים מדוללים בטמפרטורת החדר למשך שעה. שטפו את השקופיות שלוש פעמים במשך חמש דקות במאגר כביסה עם תסיסה עדינה. לאחר מכן, דגרו את המגלשות בקומפלקס חזרת ביוטיניל בטמפרטורת החדר בחושך למשך שעה. חזור על הכביסה כפי שתואר קודם לכן. לאחר מכן, דגרו את המגלשות עם רצועות מצע מי חמצן למשך שתיים עד חמש דקות בטמפרטורת החדר.

שטפו את השקופיות במי ברז, וטבלו את השקופיות בתמיסת המטוקסילין כדי להכתים אותן. לאחר מכן שטפו היטב את המגלשות במי ברז עד שהמים צלולים. ייבשו את המגלשות על פי פרוטוקול טקס. לבסוף, כסו את השקופיות עם מדיום הרכבה על בסיס קסילן והניחו להן להתייבש על משטח ישר בטמפרטורת החדר.