JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:08 דק' • April 28th, 2025
התחל עם דגימת רקמת מוח, שאינה שקופה עקב נוכחות של פיגמנטים ושומנים. רכיבים אלה גורמים לפיזור אור בתאי עצב המסומנים פלואורסצנטית.
דגירה רציפה של הרקמה בתמיסות עם ריכוזי מתנול הולכים וגדלים כדי להסיר ממנה מים ולייבש את הרקמה בהדרגה.
לאחר מכן, טפל ברקמה זו במתנול מרוכז כדי לסלק שאריות מים, ולהבטיח התייבשות מוחלטת.
לאחר מכן, העבירו את הרקמה לממס ניקוי ראשוני המכיל דיכלורומתאן ומתנול.
דגירה עם ניעור עדין כדי לאפשר לממס לחדור עמוק לרקמה.
Dichloromethane מסיר פיגמנטים ושומנים מהרקמה, מפחית את פיזור האור ומשפר את השקיפות.
לבסוף, העבירו את הרקמה לאתר dibenzyl, ממס הידרופובי ודגרו מבלי לרעוד.
הממס פועל כחומר הניקוי הסופי שמשפר עוד יותר את שקיפות הרקמה.
תהליך זה משפר את חדירת האור, ומאפשר הדמיה ברורה יותר של נוירונים מסומנים והקשרים שלהם ברקמת המוח לדוגמה.
דגרו את הדגימה באופן סדרתי ב-20%, 40%, 60%, 80% ו-100% מתנול למשך שעה אחת כל אחד בטמפרטורת החדר. לאחר מכן, דגרו אותו ב-100% מתנול טרי למשך הלילה. למחרת, דגרו את הדגימה ב-66% DCM טרי ב-33% מתנול למשך שלוש שעות בטמפרטורת החדר עם ניעור. לאחר שלוש שעות, דגרו את הדגימה באתר דיבנזיל מבלי לנער עד שהיא צלולה. לאחר מכן, אחסן אותו באתר דיבנזיל עד להדמיה.