הדמיה מיקרוסקופית אלקטרונית של אנדוציטוזיס שלפוחית סינפטית בנוירונים בהיפוקמפוס של עכבר

התחל בטיפול בתאי עצב בהיפוקמפוס של עכבר עם מאגר עתיר אשלגן המכיל פרוקסידאז חזרת או HRP.

אשלגן גבוה מבטל נוירונים פרה-סינפטיים, ומפעיל אקסוציטוזיס שלפוחית סינפטית. לאחר מכן הנוירונים מאחזרים את קרומי השלפוחית הסינפטית באמצעות אנדוציטוזיס, על ידי שילוב HRP בשלפוחיות החדשות שנוצרו. תקן את הנוירונים עם גלוטרלדהיד ושטוף כדי להסיר עודף גלוטרלדהיד.

הוסף מי חמצן ומצע כרומוגני, שמתחמצן על ידי HRP ליצירת משקעים צפופי אלקטרונים. שטפו כדי להסיר כל מצע שלא הגיב.

טפל באוסמיום טטרוקסיד כדי לשפר את ניגודיות הממברנה, ולאחר מכן שטוף את המגיב העודף. לאחר מכן, הוסף אורניל אצטט כדי לשפר את ניגודיות האברונים.

ייבשו את הנוירונים באמצעות הגדלת ריכוזי האתנול והטמיעו אותם בשרף.

זיהוי מיקרוסקופי של אזורים צפופי תאים והסרת אותם. לאחר מכן, הכינו חלקים דקים במיוחד.

העבירו קטע לרשת נחושת וצבעו אותם בחומרי ניגוד.

באמצעות מיקרוסקופ אלקטרונים שידור, שלפוחיות המכילות HRP מופיעות כמבנים צפופי אלקטרונים.

עורר את תרבית הנוירונים בהיפוקמפוס על ידי הוספת 1.5 מיליליטר של תמיסת גירוי גבוהה אשלגן לכל באר בטמפרטורת החדר למשך 90 שניות. בשלב זה, הכינו מאגר נתרן קקודילאט 0.1 מולארי ב-pH 7.4. תקן את התאים עם 4% גלוטראלדהיד במאגר נתרן קקודילאט 0.1 מולרי למשך שעה אחת לפחות בטמפרטורת החדר.

לאחר מכן, שטפו את התאים שלוש פעמים עם מאגר נתרן קק