מיקרוסקופיה אימונופלואורסצנטית של תאים עצביים מובחנים מתאים שמקורם בדם היקפי

קח שקופית רב-תאית עם כיסויים מצופים חלבון המכילים תאים עצביים היקפיים קבועים וחדירים, כולל תאי אב עצביים, אסטרוציטים ונוירונים.

הוסף פתרון חסימה כדי לחסום אתרי איגוד לא ספציפיים.

דגירה עם נוגדנים מצומדים בצבע פלואורסצנטי הנקשרים לחלבונים תאיים ספציפיים, ומאפשרים זיהוי של סוגי תאים עצביים.

שטפו עם חוצץ כדי להסיר נוגדנים לא קשורים.

דגירה עם צבע גרעיני פלואורסצנטי כדי לצבוע את הגרעינים.

העבר את תיק הכיסוי לשקופית עם מדיית הרכבה. לאחר מכן, הנח את השקופית המוכנה מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי המצויד במסננים מתאימים.

באמצעות אורכי גל ספציפיים של אור, מעוררים את הצבעים הפלואורסצנטיים, וגורמים להם לפלוט אור באורכי גל ארוכים יותר.

האותות הפלואורסצנטיים הנפלטים תואמים לחלבונים התאיים המסומנים, מדגישים באופן מובהק סוגים שונים של תאים עצביים ומאשרים את ההתמיינות של תאי דם מתוכנתים מחדש.

הוסף פתרון חסימה של PBS ו-5% BSA. חסום את התאים בטמפרטורת החדר על צלחת נדנדה למשך שעה. הכינו דילול מתאים של נוגדנים ב-1% BSA PBS ודגרו את התאים עם הנוגדנים על צלחת נדנדה למשך 1.5 שעות בטמפרטורת החדר. שטפו את התאים שלוש פעמים עם PBS למשך חמש דקות בכל שטיפה. דגרו את התאים עם DAPI והרכיבו את הכיסויים עם אמצעי הרכבה להדמיה במיקרוסקופ.