אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 5:09 דק׳ • April 28th, 2025
הנח פרוסת היפוקמפוס ממוח עכבר לבאר המכילה חוצץ. הפרוסה מכילה רשת של נוירונים המתקשרים באמצעות סינפסות.
מסופי נוירונים פרה-סינפטיים מכילים שלפוחיות מלאות במוליכים עצביים עם טרנספורטרים טרנסממברניים אופייניים, בעוד שמסופים פוסט-סינפטיים כוללים חלבוני פיגום אופייניים המווסתים קולטנים של נוירוטרנסמיטורים. שניהם משמשים כסמני מפתח למבנים סינפטיים.
החלף את המאגר בתמיסה חוסמת חדירות ודגר עם תסיסה כדי לחלחל ממברנות תאיות ולחסום אתרי קשירה לא ספציפיים.
הוסף נוגדנים ראשוניים המכוונים לסמנים הקדם-סינפטיים והפוסט-סינפטיים ודגר עם תסיסה כדי לאפשר קשירה.
שטפו את הפרוסה, הוסיפו נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור ספציפיים לנוגדנים הראשוניים, ודגרו עם תסיסה בחושך.
שטוף את הפרוסה ולאחר מכן הרכיב אותה על שקופית.
באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי, זהה את אזור העניין והגדל כדי לדמיין סינפסות.
צלם תמונות כדי לזהות את הסמנים הקדם-סינפטיים והפוסט-סינפטיים המסומנים באופן פלואורסצנטי ולהעריך את הקו-לוקליזציה שלהם בסינפסות.
כדי להתחיל בצביעה אימונופלואורסצנטית, החלף את ה-PBS בבארות הפרוסות במאגר חוסם ומחלחל, ודגירה בטמפרטורת החדר למשך 4 עד 6 שעות על השייקר. לקראת סוף שלב החסימה, יש לדלל את הנוגדן ל-VGLUT1 1 עד 2000 במאגר חוסם ומחלחל. שימו לב שדילול זה עשוי להשתנות בהתאם לחברה ולכמות הנוגדנים המשמשים. דגרו את הפרוסות בתמיסת
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים