הדמיה קונפוקלית של תנועה מיטוכונדריאלית בתוך אוליגודנדרוציטים בתרביות פרוסות מוח אורגנוטיפיות

התחל עם מערך תא אמבטיה מיקרוסקופ קונפוקלי עם תמיסת הדמיה במחזור וטמפרטורה מבוקרת.

קח קרום פולימרי הידרופילי המכיל פרוסת מוח אורגנוטיפית של עכבר שבה האוליגודנדרוציטים הומרו כדי לבטא חלבון פלואורסצנטי אדום ספציפי למיטוכונדריה וחלבון פלואורסצנטי ירוק ספציפי לציטוזול.

פלואורסצנציה כפולה מאפשרת הדמיה ברורה של הדינמיקה המיטוכונדריאלית בתוך הציטוזול של האוליגודנדרוציטים.

טבלו את הפרוסה במרכז האמבטיה ואבטחו אותה עם עוגן נבל.

הורד את המטרה ובחר אוליגודנדרוציטים בריאים לסריקה.

התאם את עוצמת הלייזר כדי למזער את רעילות התאים והלבנת האור.

הגדר פרמטרים של מיקרוסקופ ולאחר מכן הקלט תמונות זמן-lapse של מיטוכונדריה עם תווית פלואורסצנטית.

צלם תמונות z-stack בעומקים שונים כדי לקבל תצוגה תלת-ממדית ברזולוציה גבוהה של התא כולו.

עבד את התמונות כדי להמחיש את תנועת המיטוכונדריה בתוך האוליגודנדרוציטים.

השתמש במלקחיים כדי להעביר את הקונפטי עם הפרוסה מצלחת הפטרי לחלק העליון של האמבטיה. לאחר מכן הניחו את שני קצות המלקחיים מכל צד של הקונפטי כך שיגעו בקונפטי מבלי לגעת בפרוסה. ודחף את הקונפטי דרך התמיסה לתחתית האמבטיה. מרכז את הקונפטי באמצע האמבטיה.

השתמש במלקחיים כדי למקם את העוגן או הנבל על גבי הקונפטי מבלי לגעת בפרוסה. ואז הפעל שוב את המשאבה הפריסטלטית. הורד את המטרה למטה למדגם. לאחר מכן השתמש בעיניות ובמנורת הפלואורסצ