מיקרוסקופיה דו-פוטונית לחקר משיכה של תהליך מיקרוגליה לתרכובת בפרוסת מוח של עכבר

הניחו פרוסת מוח של עכבר בתא זלוף המכיל aCSF תחת מיקרוסקופ דו-פוטוני.

העכבר מהונדס גנטית לבטא GFP במיקרוגליה, מה שמאפשר מעקב אחר תנועת מיקרוגליה.

אבטח את הפרוסה בעזרת מחזיק.

באמצעות תאורת שדה בהיר, אתר את אזור העניין.

עבור לתאורה פלואורסצנטית כדי לדמיין את המיקרוגליה.

מלאו מיקרופיפטה בתרכובת הבדיקה, הרכיבו אותה על מחזיק מזרק והורידו אותה כדי לגעת בפרוסה.

הפעל מצב הדמיה של שני פוטונים, תוך מיקוד אור קרוב לאינפרא אדום באנרגיה נמוכה לתוך הרקמה.

בנקודת המוקד של הלייזר, שני פוטונים משלבים את האנרגיה שלהם כדי לעורר GFP, ופולטים פלואורסצנטיות.

צלם תמונות במישורי Z מרובים כדי להתמקד בתהליכי המיקרוגליה.

רשמו את הפעילות הבסיסית, ואז הזריקו את התרכובת והמשיכו להקליט.

התרכובת נקשרת לקולטני מיקרוגליה, ומפעילה מסלולי איתות המניעים את התרחבות תהליך המיקרוגליה לעבר מקור התרכובת.

עקוב אחר עליית הקרינה ליד אתר ההזרקה לאורך זמן כדי לעקוב אחר התנועה.

30 דקות לפני תחילת ההקלטה, חבר את המשאבה הפריסטלטית לתא הקלטה מותאם אישית עם זלוף עליון ותחתון לאופטימיזציה של החמצון והכדאיות של פרוסות הרקמה ונקה את כל מערכת הזילוף עם 50 מיליליטר מים טהורים במיוחד. בתום מחזור הניקוי, התחל את הזלוף של תא ההקלטה עם 50 מיליליטר aCSF בכוס זכוכית תחת קרבוגנציה מתמדת והשתמש בפיפטה חד פעמית להעברת פה רחב כדי להעביר את הפרוסה הראשונה להד