הדמיה מיקרוסקופית של תאי עצב בקטע מוח של עכבר באמצעות צביעה מתכתית של גולגי-קוקס

התחל עם מקטע מוח עבה שנצבע בתמיסת Golgi-Cox כדי להכהות נוירונים באופן סלקטיבי והוכתם בצבע סגול קרסיל כדי להדגיש את אזור המוח.

הנח אותם על שקופית שעברה טיפול מקדים בחומר ניקוי כדי לשפר את שקיפות הרקמות.

הנח את השקופית על המיקרוסקופ stage, מרח שמן סיליקון והורד את עדשת האובייקט עד שהיא נוגעת בשמן.

שמן סיליקון תואם את מקדם השבירה של עדשת האובייקט והשקופית, ומאפשר הדמיה מפורטת.

התמקד בדגימה, ולאחר מכן כוונן את החשיפה ואיזון הלבן של המצלמה לקבלת איכות תמונה מיטבית.

התמקד בשכבה העליונה כדי להגדיר את הגבול העליון, ולאחר מכן בשכבה התחתונה כדי להגדיר את הגבול התחתון.

התאם את המרווח בין תמונות עם חפיפה מספקת כדי ללכוד פרטים של הקרנות עצביות.

חזור על הדמיה במיקומים שונים כדי ללכוד אזורי עניין, ולאחר מכן שכב את התמונות הללו כדי ליצור ייצוג תלת מימדי של הנוירונים.

כדי ללכוד ערימות תמונות ברזולוציה גבוהה של האזור המכיל את הנוירון המעניין, בחר תחילה יעד טבילה של שמן סיליקון 30x 1.05 NA במיקרוסקופ. לאחר מכן, מרחו 3 עד 4 טיפות שמן טבילה מסיליקון על המגלשה. הנח את המטרה מעל המגלשה, והבטיח מגע בין המטרה לשמן. מקד את התמונה והתאם את הגדרות המצלמה, כולל החשיפה ואיזון הלבן בתוכנת ההדמיה. לאחר מכן, הגדר את הגבולות העליונים והתחתונים של אוסף התמונות על-ידי התמקדות בחלק העליון של המקטע, ולאחר מכן בחירה באפשרות Set, ליד החלק העליון של הערימה, בחלון רכישת התמונות.

לאחר מכן התמקד בתחתית המקטע ובחר קבע ליד תחתית הערימה. הגדר את מרחק הצעד ל-1 מיקרון על ידי הזנת 1 מיקרון ליד המרחק בין תמונות בחלון רכישת התמונה. לבסוף, לכוד את אוסף התמונות על-ידי בחירה באפשרות Acquire Image Stack בחלון רכישת התמונות. חזור על השלבים הקודמים כדי ללכוד את כל אזור העניין, וודא שכל אוספי התמונות חופפים ב- 10% לפחות בצירי x ו- y.