הדמיה של הפעלה עצבית בהיפוקמפוס בקטעי מוח של עכבר

התחל עם קטעי מוח של עכבר החושפים את ההיפוקמפוס הגבי העשיר בנוירונים.

הוסף מי חמצן כדי להרוות את פעילות הפרוקסידאז העצבי, ולאחר מכן שטיפה.

טפל עם מאגר חדירה, ולאחר מכן החל מאגר חוסם כדי לחסום כריכה לא ספציפית.

הוסף את הנוגדנים העיקריים ודגר בהתרגשות. נוגדנים אלה נקשרים לחלבוני סמן הפעלה עצביים.

שטפו ומרחו נוגדנים משניים מצומדים לביוטין כדי לקשור את הנוגדנים העיקריים.

שטפו והציגו קומפלקס avidin-biotin-peroxidase שנקשר לביוטין על המצומדים.

שטפו שוב, ואז הוסיפו מצע כרומוגני, שמתחמצן על ידי פרוקסידאז כדי ליצור משקע חום. עצור את התגובה עם PBS.

העבירו את החלקים לשקופית מצופה ג'לטין וייבשו אותם באמצעות ריכוזים הולכים וגדלים של אתנול. לאחר מכן, נקה את החלקים בקסילן והרכיב אותם.

מקם את השקופית מתחת למיקרוסקופ של שדה בהיר.

תחת תאורת אור, אזורים לא מוכתמים מעבירים אור ונראים בהירים, בעוד שתאי עצב מוכתמים סופגים ומחזירים אור ונראים כהים יותר.

האזור הכהה המובהק מצביע על הפעלה עצבית בתוך ההיפוקמפוס.

העבירו שלושה עד חמישה קטעי היפוקמפוס גביים לכל עכבר לבארות של צלחת מרובת בארות המכילה 500 מיקרוליטר של 0.1 PBS טוחנת לכל באר. שוטפים את החלקים הכלולים בכל באר עם 500 מיקרוליטר של 0.1 PBS מולארי. בצע את כל השטיפות והדגירה בטמפרטורת החדר בתסיסה עדינה, אלא אם צוין אחרת. מתחת למכסה אדים, דגרו את החלקים ב-40% מ