הדמיית שני פוטונים in vivo של רשתית העכבר
אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:32 דק׳ • April 28th, 2025
קח עכבר טרנסגני מורדם כשראשו מאובטח בזווית על מחזיק להדמיה in vivo של רשתית העכבר.
הרשתית מכילה תאי גנגליון רשתית, או RGCs, המבטאים חלבון מתויג פלואורופור.
מרחו חומר סיכה לעיניים והניחו כיסוי על העין.
תחת מיקרוסקופ, מאירים באופן אחיד את הרשתית כדי לעורר את החלבונים הפלואורסצנטיים ב-RGCs.
באמצעות הקרינה הנפלטת, קבל תצוגה רחבה של RGCs במישור המוקד ו-RGCs שאינם ממוקדים.
עבור למצב הדמיה של שני פוטונים, תוך מיקוד אור קרוב לאינפרא אדום באנרגיה נמוכה לתוך שכבת ה-RGC.
בנקודת המוקד, האנרגיה המשולבת משני פוטונים מעוררת את הפלואורופור, אשר לאחר מכן משחרר אנרגיה כפלואורסצנטיות.
מכיוון שהעירור מוגבל לנקודה אחת, הקרינה ממישורי מוקד אחרים ממוזערת.
צלם תמונות במישורי מוקד מרובים לאורך ציר z כדי לדמות את שכבת ה-RGC כולה.
מרחו טיפות עיניים על שתי עיני העכבר. סובב את הזרוע הראשית של מחזיק הראש עד שהאישון של עין אחת מכוון בקו אחד עם נתיב האור, והנח כיסוי מספר 1.5 לתוך מחזיק המסנן הקומפקטי. לאחר אבטחת המחזיק לשלב המיקרוסקופ, הורד את הכיסוי עד שהוא יוצר קשר עם חומר הסיכה i-gel מבלי לגעת בקרנית. והתאם את ה-stage בממד xy ואת מיקום z האובייקטיבי עד שנורית עירור השדה הרחב תכסה את הקרנית במלואה.
השתמש בעינית כדי להמשיך לכוונן את מיקום z, עד שהתאים הפלואורסצנטיים או המבנים ברשתית נכנסים למיקוד, והגדל את מאיר האפיפלו
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים