הדמיה פלואורסצנטית של דינמיקה נוירו-אימונית באמצעות שתל גולגולת

התחל עם עכבר טרנסגני מורדם עם חלון הדמיה עגול מזכוכית ולוחית ראש מושתלת על גולגולתו.

תאי המיקרוגליה או החיסון והנוירונים מסומנים בחלבונים פלואורסצנטיים.

לאחר מכן, הצמידו את העכבר לשלב המיקרוסקופ הדו-פוטוני.

לאחר מכן, הזריקו צבע פלואורסצנטי תוך צפקי כדי לצבוע את כלי הדם באדום.

נקה את חלון ההדמיה מזכוכית, החל טיפת מלח והורד את מטרת המיקרוסקופ.

לאחר מכן, הגדר את אור הלייזר כדי ללכוד תמונה של כלי הדם. רשום את תבנית ההסתעפות והקואורדינטות כדי לאתר ולדמות את אותו אזור מאוחר יותר.

כעת, כוונו את הלייזר לעורר את החלבונים הפלואורסצנטיים, מה שגורם למיקרוגליה ולנוירונים להאיר.

באמצעות דפוס ההסתעפות המוקלט, אתר את אותו אזור וצלם באופן קבוע תמונות של תאים.

רשת כלי הדם והנוירונים נשארים יציבים, בעוד ששינויים במיקום המיקרוגליה לאורך זמן משקפים את הדינמיקה החיסונית בתגובה לפעילות עצבית.

קדחו פתח עגול כ-4 מילימטרים לתוך הגולגולת באמצעות מקדח דנטלי. במהלך הקידוח יש להרטיב את הגולגולת באופן קבוע במי מלח סטריליים וצמר גפן כדי לקרר את המוח. נקה שאריות עצם ורכך את עצם הגולגולת.

בסיום, הסר בזהירות את החלק הזה של הגולגולת בעזרת מלקחיים מחודדים. לאחר הסרת הגולגולת, הניחו בזהירות כיסוי קטנה לחה במי מלח בגולגולת. יבש עודפי מלח באמצעות מגבון סטרילי. בעזרת אפליקטור מחודד, מרחו דבק ציאנואקרילט סביב החלון ואפשרו לו להיצמד למוח ולגולגולת.

מרחו את דבק הפריימר על שאר הגולגולת ורפא אותה בעזרת אור ריפוי למשך 20 עד 40 שניות. צרו באר סביב החלון עם הדבק הסופי ורפא אותה באור ריפוי למשך 20 עד 40 שניות. הדביקו לוחית ראש קטנה על הגולגולת בחצי הכדור הנגדי של הגולגולת בעזרת דבק הפריימר, ואז, בעזרת הדבק הסופי, ריפא את שניהם למשך 20 עד 40 שניות.

לאחר שהעכבר מתעורר, יש להזריק מנה תת עורית אחת של בופרנורפין SR כמשכך כאבים לאחר הניתוח, שיספיק ל-72 שעות. ספק לעכבר מזון רך במיוחד כדי להקל על התאוששות בריאה. ניתן לבצע הדמיה כבר שבועיים לאחר ניתוח ההשתלה. השתמש בברגים כדי להרכיב את לוחית הראש על שני המיקרוסקופ פוטונים stage, אותו יש לשמור על 35 מעלות צלזיוס עם פלטת חימום.

הזרקו לעכבר תת עורי 100 מיקרוליטר צבע כלי דם, כגון רודמין B. נקו בעדינות את פני חלון הגולגולת בעזרת צמר גפן טבול באתנול 70%. שים כמה טיפות מים או מי מלח על החלון והורד את עדשת האובייקט לתמיסה. ודא שהלייזר כבוי כאשר המטרה יורדת.

צייר ביד מפת מסלול כדי לציין את ציוני הדרך העיקריים של כלי הדם, תוך התבוננות דרך העינית. השתמש בציור זה כדי לזהות את האזורים הספציפיים במהלך הדמיית שני פוטונים. אסוף תמונות של תאים וכלי דם פלואורסצנטיים באמצעות הדמיית שני פוטונים. ראה את כתב היד של הטקסט לפרמטרים של הדמיה. רשום הערות זהירות עם קואורדינטות מתאימות כדי להבטיח שניתן יהיה לבקר מחדש את האזורים המדויקים להדמיה הבאה.

אסוף מספר שדות ראייה בפגישת הדמיה ראשונית זו.