הדמיית מיקרוסקופיה קונפוקלית של סוכות דנדריטיות שלמות ומורפולוגיה של עמוד השדרה במוח עכבר נקי

קחו מוח עכבר נקי עם תאים המבטאים חלבונים פלואורסצנטיים ושומנים שהוסרו לשקיפות להדמיה של מבנה עמוק ברזולוציה גבוהה.

רשת הידרוג'ל משמרת ביומולקולות ושומרת על רשתות עצביות.

העבירו את המוח לתא הדמיה המכיל טבעת אגרוז לתמיכה.

אבטחו את הרקמה בדבק ומלאו את התא בתמיסה תואמת מקדם שבירה כדי למזער את פיזור האור וליצור סביבת הדמיה יציבה.

הנח את החדר על במת מיקרוסקופ קונפוקלי והורד בעדינות את המטרה לתוך התמיסה כדי ליצור עמודת מגע רציפה.

השתמש באפיפלואורסצנציה כדי לאתר אזורי עניין. לאחר מכן, התאם את פרמטרי הלייזר וההדמיה כדי למטב את איכות התמונה.

לכוד סדרה של ערימות z כדי ליצור ייצוג תלת מימדי של הרקמה.

השתמש בתוכנה מתאימה לניתוח מורפולוגיה תאית, כולל סוכות דנדריטיות, עמוד השדרה שלהם והתפלגות וצפיפות הנוירונים.

כדי לבנות תא הדמיית רקמות גדול לרקמות בעובי של יותר מ-5 מילימטרים, השתמש בצלחת זכוכית של 10 ס"מ עם דופן גבוהה. הנח צינור חרוטי של 50 מיליליטר במרכז, וודא שקוטר הצינור גדול מספיק כדי לקבל את הקנה של עדשת האובייקט בה נעשה שימוש. הכינו 3% אגרוז במים ושפכו אותו בחלל שבין צלחת הזכוכית לצינור החרוטי.

לאחר מכן הניחו לו להתקרר למשך שעה. זה ייצור טבעת של אגרוז מוצק. הדביקו היטב את הרקמה לתחתית החדר באמצעות דבק-על, ומלאו את החדר בתמיסה תואמת מקדם שבירה, שעלולה להתחיל להתפלמר אלא אם כן נשמרת מהאוויר ומא