הדמיה אורכית דו-פוטונית של נוירונים המסומנים פלואורסצנטית בהיפוקמפוס של עכבר חי

קחו עכבר טרנסגני מורדם המבטא חלבונים פלואורסצנטיים בתאי עצב פירמידליים דלילים.

העכבר מושתל בצינורית הדמיה מעל ההיפוקמפוס הגבי.

מקם את העכבר מתחת למיקרוסקופ דו-פוטוני על כרית חימום, והצמד את לוחית הראש של הצינורית למחזיק כדי לשתק את ראשו.

מרחו משחה למניעת ייבוש הקרנית.

נקה את הצינורית במים נטולי יונים ובדוק אותה תחת יעד הגדלה נמוכה כדי לבדוק אם יש פסולת, נזק או בעיות פלואורסצנטיות.

יישר את צינורית ההדמיה עם הציר האופטי של המיקרוסקופ להדמיה מדויקת.

לאחר מכן, עבור ליעד טבילה במים ברזולוציה גבוהה.

מלאו את הצינורית במים נטולי יונים, והבטיחו שאין בועות אוויר כדי למנוע עיוות תמונה.

בצע הדמיה אורכית של שני פוטונים באמצעות אור אינפרא אדום כדי לעורר באופן סלקטיבי פלואורופורים במישור המוקד, מה שמאפשר הדמיית רקמות עמוקות.

הצינורית המושתלת מאפשרת גישה חוזרת ונשנית להיפוקמפוס הגבי כדי לעקוב אחר שינויים דנדריטיים לאורך זמן.

מקם את העכבר מתחת למיקרוסקופ מעל שטיח החימום והדק את לוחית הראש למחזיק. מרחו משחת עיניים על עיני החיה. לאחר מכן נקו את צינורית ההדמיה באמצעות מזרק ומחט דקה כדי להפיל מים נטולי יונים לתוך הצינורית, ולאחר מכן הסרה באמצעות משאבת ואקום.

השתמש במטרות בהגדלה נמוכה למרחקי עבודה ארוכים כדי לבדוק ויזואלית את הצינורית לאיתור שאריות מים, לכלוך, שלמות ונוכחות פלואורסצנטית. לאחר מכן יישר את הצינורית לציר האופטי על ידי התאמת הזוויות של זרועות מחזיק הראש.

עבור למטרה של פי 25 עם צמצם מספרי של 1.0 ומרחק עבודה של 4 מילימטרים. לאחר מכן הוסף מספיק מים נטולי יונים לצינורית כדי למלא אותה ולשמור על עודפי מים על גבי הצינורית. לבסוף, השתמש בשני עירור פוטונים ודמיין את האותות הפלואורסצנטיים.