ניטור התאוששות של תאים בין-נוירומסטים בלייזר בדגי זברה באמצעות מיקרוסקופיה קונפוקלית

התחל עם זחל דג זברה המכיל תאים בין-נוירו-מותניים או INMCs המסומנים פלואורסצנטיים, המורכבים על כיסוי ומונחים תחת מיקרוסקופ קונפוקלי.

INMCs הם תאי אב בעלי יכולת התחדשות שעברו בעבר אבלציה בלייזר.

ראשית, התבונן באזור הפגוע במצב פלואורסצנטי. היעדר פלואורסצנטיות מאשר אבלציה מוצלחת בלייזר.

לאחר מכן, השתמש במצב הדמיית אור מועבר כדי לבחון את האזור הפגוע שבו התא נראה גרגירי ונפוח עם גרעינים לא סדירים, מה שמאשר את מוות התאים.

גיוס מקרופאגים לאתר מעיד על תגובה תאית פעילה לפציעה.

כעת, חזור למצב פלואורסצנטי וצלם תמונות דולג זמן במרווחי זמן קבועים כדי לעקוב אחר ההתאוששות.

במהלך שלב ההתאוששות, INMCs מרחיבים את ההקרנות לתוך הפער, מה שמקל על הסגירה ומקדם תיקון תאי.

שמור תמונות סדרות זמן אלה לניתוח. הופעתו המחודשת של פלואורסצנטיות מובהקת באזור המנותק מאשרת התאוששות מוצלחת של התאים.

להדמיה של גופי התאים לאחר האבלציה, בתפריט ערוצים, בטל את הלחיצה על מסלול ה-DAPI כדי להשבית את לייזר האבלציה ופתח את תפריט מצב הרכישה. לחץ על גודל תצוגה והקטן את גודל התצוגה ל- 0.7.

כדי להעריך את הצלחת האבלציה של התאים, סרוק במהירות את שדה הראייה. שימוש באותן הגדרות כמו אלה של הדמיית קדם-אבלציה, לכוד ושמור תמונה לאחר האבלציה. בדוק את תמונת ערוץ צינור מכפיל האור המועבר כדי לאשר עוד יותר את הנזק התאי. תאים פגומים יפגינו מראה גרגירי, והגרעינים יתנפחו לעתים קרובות או ייראו לא סדירים בצורתם.

כדי להעריך את התאוששות גוף התא לאחר האבלציה, הפעל הן את מיקום הבמה והן את אפשרויות הזמן לצילום תמונות זמן, והגדר את פרמטרי הזמן לנקודת הזמן הניסיוני המתאימה ולמרווחים של 15 דקות. לאחר מכן התחל את הניסוי כדי לרכוש תמונות, ושמור את הקובץ שהתקבל בסיום.