הדמיית סידן של פעילות נוירונים מעיים וגליה במקלעת מיאנטרית של עכבר

קחו תא הדמיה המכיל רקמת מקלעת מיאנטרית של עכבר משותק, המאכלס מקלעות גנגליון המורכבות מרשתות של נוירונים מעיים ותאי גליה.

תאים אלה מסומנים במחוון סידן שזוהר עם קשירת סידן.

לאחר מכן, הנח את החדר על במת מיקרוסקופ פלואורסצנטי. חדרו את החדר עם מאגר מחומם מראש המכיל מעכבים לדיכוי התכווצויות שרירים במהלך ההדמיה.

בעזרת מיקרוסקופ, זהה אזורים גנגליוניים בריאים המציגים פלואורסצנטיות אחידה.

רכוש תמונות פלואורסצנטיות כדי למדוד את הפעילות הבסיסית, תוך מתן התייחסות לרמות הסידן התוך תאי.

לחלחל את הרקמה עם אגוניסט קולטן כדי להפעיל קולטנים עצביים, מה שמפעיל זרם סידן תוך תאי ועלייה בעוצמת הקרינה.

הפעלה עצבית מגרה בעקיפין את תאי הגליה שמסביב, מה שמוביל לזרם סידן ולעלייה לאחר מכן בקרינה.

צלם תמונות פלואורסצנטיות בזמן-lapse כדי למדוד שינויים בעוצמת הקרינה, המצביעים על דינמיקת סידן ופעילות איתות הן בתאי עצב והן בתאי גליה ביחס לרמות הבסיס.

במהלך הדגירה, הכינו מאגר קרב'ס מותאם בהתאם להוראות בחלק הכתוב של הפרוטוקול, והוסיפו 3 ניקרדיפין מיקרו-מולרי ו-1 סקופולמין מיקרו-מולרי כדי לעכב את התכווצויות השרירים במהלך סידן 2 בתוספת הדמיה בדיסקציה שלמה. מקם את תא ההקלטה מתחת למיקרוסקופ הפלואורסצנטי, ובאמצעות מערכת זלוף זרימת כבידה עם מאגרי מזרק מחוממים מרובים, קבע קצב זלוף רציף של 2 עד 3 מיליליטר לדקה של 37 מעלות צלזיוס קרב