אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 4:53 דק׳ • May 29th, 2025
קחו תלוש כיסוי עם תרבית של נוירונים במוח התיכון הגחוני שמקורם בעוברי עכברים.
התאים נגועים בווקטור ויראלי כדי לבטא אינדיקטור סידן.
העבר את הכיסוי לתא ההקלטה של מיקרוסקופ קונפוקלי עם מאגר הקלטה.
באמצעות אור נראה, זהו אזור המכיל תאי עצב מרובים, ואז עברו להדמיה פלואורסצנטית.
ברמות סידן תוך תאיות נמוכות, המחוון נשאר לא קשור, ומציג עוצמת פלואורסצנטיות נמוכה.
תכונות מהותיות של הנוירונים מייצרות פוטנציאל פעולה ספונטני, המפעיל תעלות סידן מגודרות מתח להיפתח ולאפשר זרימת סידן.
עודף הסידן נקשר לאינדיקטור, וגורם לשינוי קונפורמציה המגביר את עוצמת הקרינה.
רשום את עוצמת הקרינה לאורך זמן כדי לעקוב אחר פעילות הסידן הספונטנית.
הכנס נוירוטרנסמיטר בריכוז גבוה, שנקשר לקולטנים על הנוירונים, ויוצר פוטנציאל פעולה מתמשך.
הפעלת תעלת הסידן המתמשכת מאריכה את זרימת הסידן, וגורמת לעלייה מתמשכת בעוצמת הקרינה.
הכן 1 ליטר של מאגר ההקלטה HEPES, 200 מיליליטר של 20 מאגר הקלטה גלוטמט מיקרו-מולרי, ו-200 מיליליטר של מאגר הקלטה NBQX 10 מיקרו-מולרי בהתאם להוראות כתב היד. מלאו צלחת פטרי סטרילית בגודל מילימטר ב-3 מיליליטר ממאגר ההקלטה.
קח את צלחת הפטרי עם התרביות הנגועות מהחממה, ואז תפוס בזהירות את קצה הכיסוי עם מלקחיים עדינים והעביר אותה לתוך הצלחת עם מאגר ההקלטה. הנח את הכיסוי הנותר במדיום בחזרה לאינקובטור של 37 מעלות צלזיוס, והעבר
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים