הדמיית פלאק עמילואיד-בטא במקטעים של רקמת המוח על ידי תיוג חיסוני וצביעת כורכומין

התחילו עם מקטעי מוח ממודל של עכברים ניווניים.

דגרו עם תמיסת חסימה בתוספת חומר ניקוי כדי להגביר את חדירות הרקמות ולחסום קשירה לא ספציפית. השליכו את הפתרון.

הציגו נוגדנים ראשוניים המכוונים לפלאק עמילואיד-בטא. דגרו עם תסיסה לנוגדנים לאינטראקציה עם פלאק עמילואיד-בטא, ולאחר מכן שטפו.

הוסיפו נוגדנים משניים אדומים עם תיוג פלואורופור ודגרו בחושך כדי לאפשר לנוגדנים לקיים אינטראקציה.

יש לשטוף כדי להסיר נוגדנים לא קשורים, ולאחר מכן לשטוף אלכוהול.

הוסיפו כורכומין, הקושר עמילואידים עשירים ביריעות בטא עם זיקה גבוהה, ולאחר מכן שטפו.

לאחר מכן, טפל בהגדלת ריכוזי האלכוהול, ייבוש חלקי המוח. הוסף קסילן כדי להסיר עקבות של ריאגנטים.

הרכיב קטע על שקופית והתבונן תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי.

השתמש בלייזר באורך גל של 590 ננומטר כדי לעורר את הפלואורופורים האדומים על הנוגדנים המשניים. צלמו את התמונה.

עברו ללייזר באורך גל של 480 ננומטר כדי לעורר את הכורכומין, ולפלוט פלואורסצנטיות ירוקה.

שכבו את התמונות; קולוקליזציה של פלואורסצנטיות אדום וירוק מאשרת רובד עמילואיד-בטא ברקמת המוח.

לתיוג דגימות בחתך קריוסטט עם נוגדנים נגד בטא A, שטפו את הדגימות שלוש פעמים עם PBS טרי לכל שטיפה בבארות בודדות של צלחת של 12 בארות לפני חסימת כל קשירה לא ספציפית עם 10% סרום עיזים רגיל ב-PBS ו-0.5% טריטון x-100 למשך שעה בטמפרטורת החדר.

בתום הדגירה, השליכו את תמיסת החסימה, ודגרו את הדגימות עם נוגדן ספציפי A בטא למשך הלילה ב-4 מעלות צלזיוס ו-150 סיבובים לדקה. למחרת בבוקר, שטפו את החלקים בשלוש שטיפות של 10 דקות ב-PBS טרי לכל שטיפה ולאחר מכן דגירה עם נוגדן משני מתאים מצומד עם פלואורופור אדום למשך שעה בטמפרטורת החדר מוגן מאור.

בתום הדגירה יש לשטוף את החלקים שלוש פעמים עם PBS ואחריה שטיפה אחת עם 70% אלכוהול. לאחר שטיפת האלכוהול, דגרו את החלקים עם 10 כורכומין מיקרו-מולרי למשך 10 דקות בטמפרטורת החדר ולאחר מכן שלוש שטיפות של דקה אחת 70% אלכוהול.

לאחר הכביסה האחרונה, ייבשו את החלקים ב-90% ו-100% אלכוהול למשך דקה אחת לכל ריכוז, ונקו את החלקים פעמיים למשך חמש דקות לטבילה עם קסילן טרי לכל דגירה. לאחר מכן הרכיב ודמיין את החלקים כפי שמודגם.