הדמיה תלת מימדית של זיהום בנגיף הכלבת ברקמת מוח של עכבר

קח קטע מוח עבה קבוע מעכבר נגוע בנגיף הכלבת.

הנגיף מדביק נוירונים ומשתכפל, וכתוצאה מכך חלבונים נגיפיים נמצאים בתוך התאים.

טפל בחומר ניקוי כדי לחלחל את ממברנות התאים ובתמיסה חוסמת כדי להסוות אתרי קשירה לא ספציפיים.

דגירה עם נוגדנים ראשוניים המכוונים לחלבונים הנגיפיים, ואחריהם נוגדנים משניים מצומדים פלואורופור הנקשרים לנוגדנים הראשוניים.

טפל בצבע קושר חומצות גרעין פלואורסצנטיות כדי לסמן את הגרעין.

יש לייבש את הרקמה בהגברת ריכוזי האלכוהול, ולאחר מכן למרוח תמיסת ניקוי כדי להגביר את שקיפות הרקמות להדמיה.

התקן את החלק בתא הדמיה, מלא אותו בתמיסת הניקוי ואטום אותו.

באמצעות מיקרוסקופ סריקת לייזר קונפוקלי, צלם את הרקמה בנפרד באמצעות תוויות הפלורסנט, ולאחר מכן מזג אותן ליצירת תמונה דו מימדית.

רכוש תמונות במישורי מוקד שונים על פני הרקמה ושלב אותן ליצירת ייצוג תלת מימדי להערכת התקדמות הזיהום.

לצביעה חיסונית של חלקי רקמת המוח, יש לשטוף את הדגימות פעמיים למשך שעה אחת ב-4 מיליליטר של 0.2% טריטון X-100 ב-PBS, ולאחר מכן חדירה למשך יומיים ב-37 מעלות צלזיוס, ב-4 מיליליטר של 0.2% טריטון X-100, 20% דימתיל-סולפוקסיד ו-0.3 גליצין מולרי ב-PBS. חסום כל קישור לא ספציפי עם 4 מיליליטר של 0.2% טריטון X-100, 10% דימתיל-סולפוקסיד ו-6% סרום רגיל ב-PBS למשך יומיים ב-37 מעלות צלזיוס.

בתום הדגירה החוסמת, סמנו את הדגימות ב-2 מי