שימוש ברפלקטומטריה ספקטרלית לקביעת קוטר אקסון מיאליני בפרוסת מוח קבועה של עכבר

קח מיקרוסקופ קונפוקלי היפרספקטרלי עם מקור לייזר מיוצב המוגדר לטווח ספקטרלי רחב כדי לפענח את ננו-מבנה מעטפת המיאלין של רקמת המוח.

השתמשו במראה ייחוס כדי ללכוד את ספקטרום ההשתקפות של קו הבסיס. הסר את המראה ורכוש ספקטרום אופסט כהה לתיקון רעשי גלאי.

להעביר תא עם קטע רקמת מוח קבוע לשלב המיקרוסקופ.

יישר את מישור המוקד לאזור הרקמה המבוקש, תוך הקפדה על עומק מספיק כדי למזער הפרעות מממשק רקמת הזכוכית.

אור לייזר מופנה אל מעטפת המיאלין הרב-שכבתית של האקסונים.

כאשר האור מקיים אינטראקציה עם המיאלין, מתרחשות השתקפויות חלקיות בממשקי השכבות, ומייצרות דפוסי התאבכות עקב עובי שכבות משתנה ומקדמי שבירה.

רכוש תמונות ספקטרליות של דפוסי התאבכות אלה.

לאחר תיקון בסיס וניתוח אותות, ספקטרום ההחזר חושף את מחזוריות מספר הגל, ומאפשר קביעת קוטר אקסון מיאליני.

התקן מראת ייחוס על המיקרוסקופ stage, כאשר המשטח פונה לעדשת האובייקטיב. אם לא קל לשים את המראה על במת המיקרוסקופ, הדביקו מראה על הצלחת השטוחה. כוונן את המיקרוסקופtagה כדי ליישר את מישור המוקד למשטח המראה. לאחר מכן, כוונן את רווח ה-PMT ואת עוצמת הלייזר, בהתחשב בטווח הדינמי של הגלאי.

תחת פסאודו-צבע, בדוק שאין רוויה בכל טווח אורכי הגל. אם נצפתה רוויה, הורד את עוצמת הלייזר. לאחר מכן, הפעל את רכישת סריקת הלמבדה. הסר את המראה מהבמה, וחזור על אותה רכישה ללא דגימה על מנת לקבל