הדמיה של הקרנות נוירונים מוטוריים והסתעפות אקסונים באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי של יריעות אור

קח מקטע רקמה קבוע ונקי כימית מעובר עכבר טרנסגני המבטא חלבון פלואורסצנטי ירוק (GFP) בנוירונים מוטוריים בעמוד השדרה.

הרכיבו את הרקמה אנכית על קצה פיפטה שונה.

חבר את הקצה לנימים המאובטחים בתוך מיקרוסקופ הקרינה של גיליון האור.

הנח תא דגימה מלא חיץ מתחת לרקמה כדי לטבול אותה ולנקות פסולת.

באמצעות תוכנת הדמיה, יישר את הרקמה בנתיב האור.

התחל ברכישת תמונה.

מקור האור פולט יריעה דקה של אור לייזר, ומעורר GFPs במישור יחיד של הרקמה כדי לפלוט פלואורסצנטיות.

גלאי הממוקם בניצב לנתיב האור לוכד את הקרינה הנפלטת.

רכוש תמונות של הנוירונים המוטוריים בעמוד השדרה כדי ליצור שחזור תלת מימדי של מורפולוגיה של הסתעפות אקסונלית.

השתמש בתוכנה כדי למפות אקסונים, לזהות דפוסי הסתעפות ונקודות קצה כדי להעריך את הצמיחה והקישוריות של נוירונים מוטוריים.

הגדר אופטיקת תאורה 5X/0.1 ואופטיקת זיהוי 5X/0.16. הרכיבו את מחזיק המדגם ואת הנימים לדוגמה. הכן את תא הדגימה על ידי מילויו בתמיסת ניקוי. כדי להרכיב את העובר, הכינו קצה פיפטה P200 על ידי חיתוך החלק העליון כך שיתאים לקוטר הנימים, והסר את החלק המחודד לחיבור הדגימה.

לאחר מכן, ממיסים את הקצה הקהה של קצה הפיפטה בעזרת להבה קטנה. כבו את הלהבה והצמידו במהירות את העובר אנכית לקצה המומס. הכנס את החלק העליון של קצה הפיפטה עם נימי הדגימה, והכניס את תא הדגימה המוכן למיקרוסקופ. באמצעות תוכנת ההד