הדמיה היסטוכימית של מודולים בקליפת המוח במקטעי מוח שטוחים

התחל עם חלקים משיקים קבועים מראש של חלקי קליפת המוח השטוחים. שטפו כדי להסיר עקבות קיבוע.

צבעו את החלקים בתמיסה של diaminobenzidine או DAB וניקל-אמוניום סולפט.

DAB מתפזר לתאי עצב בקליפת המוח ומגיב עם ציטוכרום אוקסידאז במיטוכונדריה, ויוצר משקע כהה. ניקל-אמוניום גופרתי מכהה את המשקעים, ומשפר את הניגודיות.

הוסיפו פרפורמלדהיד כדי לעצור את תגובת הצביעה, ולאחר מכן שטפו.

הרכיבו את החלקים על שקופית וייבשו אותם עם שטיפות אתנול.

שטפו עם איזופרופנול וקסילן כדי לנקות את החלק ולשפר את העברת האור.

מרחו מדיום הרכבה והניחו עליו כיסוי.

כאשר מצולמים תחת מיקרוסקופ שדה בהיר, בתוך הנוירונים בקליפת המוח, המשקעים סופגים ומפזרים אור, מה שגורם להם להיראות כהים.

לעומת זאת, אזורים לא מוכתמים ומנקים מעבירים אור ונראים בהירים.

ניגודיות זו מדגישה מודולים בקליפת המוח כמבנים כהים וטלאיים על רקע בהיר יותר, המייצגים אשכולות עצביים פעילים המעורבים בעיבוד מידע חושי.

שטפו את רקמת החתך במאגר HEPES למשך 15 דקות בתסיסה עדינה. במהלך הכביסה, הכינו תמיסת צביעה טרייה של ציטוכרום אוקסידאז, והוסיפו את רכיב ה-DAB ממש לפני השימוש בו. כעת, דגרו את החלקים בתמיסת הצביעה הטרייה בטמפרטורת החדר בעזרת שייקר. והמשיכו לעקוב. בהתאם לכמות הקיבוע, ניתן להבחין בכתמים תוך 10 דקות, או שזה עשוי להימשך מספר שעות.

אם התגובה איטית מדי, העלו את הטמפרטורה ל-37 מעלות צלזיוס. כדי לעצור את התגובה, העבירו את החלקים לאמבטיה של 4% PFA, ותנו להם לדגור במשך 15 דקות בתסיסה עדינה. לאחר מכן, שטפו את החלקים שלוש פעמים עם חוצץ HEPES למשך 10 דקות בכל כביסה.

כעת, הרכיבו וייבשו את החלקים על מגלשות זכוכית, וייבשו אותם באמצעות אמבטיות אתנול חזקות יותר ויותר. לאחר מכן, שטפו את השקופיות באיזופרופנול למשך 5 דקות, ולאחר מכן קסילן למשך חמש דקות. לאחר אמבט הקסילן, הוסף מיד אמצעי הרכבה מהיר שאינו מבוסס מים. מדיומים על בסיס מים ישפילו את הכתם. לאחר הוספת כיסוי, אחסן את השקופיות ב-4 מעלות צלזיוס עד לתמונה.