ניתוח תאים חיסוניים ברקמות עצבים של עכברים באמצעות ציטומטריית זרימה

קח תאים שבודדו מעצבים סיאטיים של עכברים וגרעיני שורש גב או DRGs.

דגירה עם נוגדנים מתויגים פלואורופור כנגד CD45 ו-CD11b, ועם נוגדנים מתויגים ביוטין כנגד MHC Class II, כדי לסמן תאים חיסוניים.

דגירה עם סטרפטווידין מתויג פלואורופור שנקשר לביוטין.

טפל עם קיבוע לייצוב המבנה התאי.

הציגו מאגר חדירות עם כתם DNA פלואורסצנטי כדי לחלחל ממברנות ולתייג את הגרעינים.

בעזרת ציטומטר זרימה, העבירו את התאים דרך קרן הלייזר כדי להעריך את המאפיינים האופטיים והפלואורסצנטיים.

הסר אגרגטים עם פלואורסצנטיות DNA גבוהה יותר כדי לבודד תאים בודדים ולזהות את הקרינה מהסמנים.

לזהות תאים המבטאים CD45, סמן אופייני לתאי חיסון, המאשר את נוכחותם.

רוב התאים החיוביים ל-CD45 ב-DRG מבטאים CD11b ו-MHC Class II, מה שמעיד על תאים דמויי מיקרוגליה, שנעדרים בעצבים הסיאטיים.

טכניקה זו משלימה הדמיה לניתוח הטרוגניות של תאי חיסון בתוך רקמות עצבים.

במחשב, בחר את הערוצים המתאימים לזיהוי הפלואורופורים המעניינים, את קצב הזרימה המתאים לדגימות ואת המספר הכולל של האירועים שיש לאסוף לכל דגימה. מספר האירועים המינימלי צריך להיות מיליון.

לאחר מכן, צור תרשימי פיזור תחת גליון עבודה גלובלי של פיזור הצד A לעומת הפיזור הקדמי A, כמו גם עבור כל פלואורופור מעניין לעומת הפיזור הקדמי A. כמו כן, צור תצוגה סטטיסטית שתציג את מספר האירועים ואת עוצמת הקרינה הממוצעת עבו