אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:59 דק׳ • May 29th, 2025
קחו למשל תוספת ממברנה המכילה פרוסות מוח אורגנוטיפיות עובריות של עכבר, שבהן נוירונים ותאי גליה רדיאליים מבטאים חלבונים פלואורסצנטיים, ומאפשרים את הדמייתם.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי, בחר פרוסה עם נוירונים בקליפת המוח הפלואורסצנטיים הנודדים רדיאלית לכיוון פני השטח הפיאליים של הפרוסה באמצעות פיגומי גליה רדיאליים שלמים.
העבירו את תוספת הממברנה עם הפרוסה שנבחרה לכלי עם תחתית זכוכית עם מדיה לתמיכה בפעילות התאית במהלך ההדמיה.
הנח את הצלחת בתא מבוקר האקלים של המיקרוסקופ הקונפוקלי ההפוך כדי להבטיח את כדאיות התא.
התאם את פרמטרי ההדמיה כדי לצלם תמונות ברורות תוך מזעור נזקי השמש.
לאחר מכן, הגדר מחסנית Z באזור הממוקד כדי לדמיין מבנים סלולריים.
התחל הדמיית זמן-lapse במרווחי זמן קבועים.
נתח את התמונות כדי להעריך את הנדידה הרדיאלית של הנוירונים בקליפת המוח מהאזור התת-חדרי לכיוון הלוח הקורטיקלי לאורך פיגומי גליה רדיאליים, תוך הדגשת דפוסי נדידה עצביים.
בחרו פרוסת מוח להדמיה על-ידי הצגת הפרוסות דרך מיקרוסקופ הפוך. בחר פרוסה עם נוירונים בודדים בהירים ב-SVZ העליון, הנודדים רדיאלית לעבר פני השטח הפיאליים של הפרוסה.
נוכחותם של תהליכים פלואורסצנטיים עדינים של תאי גליה רדיאליים המשתרעים על פני כל צלחת קליפת המוח מצביעה על פיגום גליה רדיאלי שלם, המשמש נוירונים נודדים בקליפת המוח.
מעבירים את תוספת הממברנה עם פרוסה נבחרת לכלי תחתית זכוכית בקוטר 50 מילימטר המכיל 2 מיליליטר מדיום תרבית פרוסות. הכניסו את המנה לתא האקלים של המיקרוסקופ הקונפוקלי.
הגדר את הרזולוציה ל- 512 על 512 פיקסלים. הגדל את מהירות הסריקה מ-400 הרץ ל-700 הרץ כדי להגדיל את קצב הפריימים מכ-1.4 לכ-2.5 פריימים לשנייה. השתמש בממוצע לא יותר מפעמיים.
הגדר מחסנית Z דרך האזור האלקטרופוטרי בגודל צעד של 1.5 מיקרון. התחל את סדרת קיטועי הזמן על ידי לקיחת מחסנית Z כל 30 דקות. ההגדרות המתוארות מאפשרות רזולוציה ובהירות מספיקות של התמונה תוך שמירה על נזקי אור נמוכים במהלך הרכישה.