אבלציה סלקטיבית של לייזר חד-נוירון בזחל דג זברה באמצעות מיקרוסקופ קונפוקלי

קח תמיסת אגרוז שחוממה מראש המכילה זחל דג זברה טרנסגני מורדם המבטא חלבון פלואורסצנטי בנוירונים מוטוריים בעמוד השדרה.

העבירו את הזחל לצלחת זכוכית עם טבעת אגרוז.

בעזרת מיקרוסקופ, סובב את הזחל על צידו. לאחר מכן, אפשר לאגרוז להתמצק, ומשתק את הזחל.

הוסף חוצץ המכיל חומר הרדמה לשמירה על ההרדמה.

הנח את הצלחת על שלב המיקרוסקופ הקונפוקלי והשתמש בהדמיית שדה בהיר כדי לאתר את אזור חוט השדרה הגבי.

עבור למצב פלואורסצנטי כדי להמחיש נוירונים מוטוריים פלואורסצנטיים.

קבע את מישור ה-z המרכזי של סומה התא למיקוד אבלציה מדויק.

הגדר פרמטרי הדמיה לרכישה ברזולוציה גבוהה תוך מזעור נזקי האור.

לאחר שמישור ה-z הרצוי נמצא במיקוד, בצע אבלציה באזור נוירוני המטרה באמצעות לייזר אולטרה סגול ממוקד.

אנרגיית לייזר משבשת מבנים תאיים, גורמת לאובדן פלואורסצנטי ולמוות של תאים. אובדן פלואורסצנטי בלתי הפיך מאשר אבלציה מדויקת מבלי להשפיע על התאים שמסביב.

השתמש בפיפטה מתכווננת כדי למשוך זחל ולתת לו לשקוע לתחתית הקצה. זרוק את הזחל בנפח מינימלי של נוזל לאגרוז שחומם מראש, ואז משך את הדג עם אגרוז והוציא אותו במהירות לכלי זכוכית תחתון 35 מילימטר שהוכן בעבר. תחת מיקרוסקופ דיסקציה, השתמש במכחול רגיל כדי למקם את החיה, או מספר בעלי חיים, בתוך האגרוז בצדדים, כך שהגוף והזנב יהיו שטוחים.

הניחו לדג המוטבע לשבת במשך 10 עד 15 דקות עד שהאגרוז מתייצב