אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 3:19 דק׳ • May 29th, 2025
התחל עם קטע רקמת מוח של עכבר המכיל את אזור העניין במאגר כדי לשמור על לחות במהלך ההדמיה.
הרקמה מתקבלת ממודל של עכבר מחלת אלצהיימר שהוזרק עם מתוקסי X04, צבע פלואורסצנטי.
מתוקסי X04 נקשר במיוחד למבני יריעות קפלים β בלוחות עמילואיד ושומר על הקרינה שלו לצורך הדמיה וניתוח.
באמצעות מיקרוסקופ פלואורסצנטי עם מסנן UV, עורר את המתוקסי X04 וללכוד את הקרינה הנפלטת כדי לדמיין פלאק עמילואיד עם תווית פלואורסצנטית כנגד הרקמה שמסביב.
מבלי להתאים את שלב המיקרוסקופ, צלם תמונות של אותו אזור במצב שדה בהיר כדי לפרט את מבנה הרקמה ומצב הקרינה כדי לדמיין את הפלאק.
יישר את תמונות השדה הבהיר והפלואורסצנטי באמצעות תוכנת עיבוד תמונה כדי למפות במדויק את הפלאק על המבנים האנטומיים.
תמונות אלה מספקות הדמיה מפורטת של פלאק עמילואיד בהקשר המבני שלהם כדי לחקור את הפתולוגיה של מחלת האלצהיימר.
בעזרת אטלס מוח של עכבר סטריאוטקסי, בחר קטעי מוח המכילים את אזור העניין, ומקם כל חלק בחומר קריופרוטקטנט בבאר של צלחת תרבית של 24 בארות. לאחר מכן, השתמש בפיפטה חד פעמית כדי להוסיף טיפה של PBS על שקופית מיקרוסקופ ולאחר מכן הנח את החלק על הטיפה.
בחן את הקטע תחת מיקרוסקופ פלואורסצנטי כדי לזהות אזורים המכילים פלאק A-beta המסומן במתוקסי-X04. מבלי להזיז את שלב המיקרוסקופ, צלם תמונות של אזורי העניין בשדה בהיר כמו גם במצב פלואורסצנטי. כל תמונה חייבת להראות את אותו אזור בשני השדות כדי לתאם את הפלאק לאזור המבני של קטע הרקמה.
שמור ותן שם לתמונות שצולמו בהתאם למספר החיה. כמו כן, רשום את מספר הבאר בצלחת ואת שדה התמונות שצולמו. הנח את החלק בחזרה לבאר המיועדת לאחר השלמת ההדמיה. בדוק את החלק הבא ברצף באמצעות אותו הליך כדי למנוע ייבוש החלקים.
כדי ליישר את התמונות, פתח את תמונות השדה הבהיר ושדה ה-UV עבור אותו החזר על ההשקעה בתמונה J. לאחר מכן, השתמש בתוסף הפסיפס J כדי ליישר את הקצוות של שתי התמונות. שמור את התמונה המיושרת והמשולבת לפי מספר הבאר בתיקיה, עם מספר החיה המסוימת. שלב את התמונות מחלקים שונים של אותה חיה כדי לזהות ולמקם את הלוחות באזור העניין.