JoVE Encyclopedia of Experiments
מדעי המוח
0 צפיות • 2:27 דק' • May 29th, 2025
התחל עם עכבר מורדם עם דלקת מוח אוטואימונית ניסיונית או EAE. מצב זה גורם לדלקת בעיניים ובמוח.
הנח את העכבר במכשיר הדמיה, יישר את הגב העליון במרכז.
כסה את החלק התחתון של העכבר במטלית שחורה כדי למנוע הפרעות אות מאזור זה.
השתמש בתוכנת הדמיה כדי לתעד את מיקום העכבר.
קח מזרק מלא במגיב המכיל את המצע הביו-לומינסנט והזריק אותו תוך צפקי לעכבר.
המגיב מסתובב ונכנס לאתר הדלקת, שם המצע מקיים אינטראקציה עם אנזימים ספציפיים לדלקת.
תגובת האנזים-סובסטרט מייצרת אות ביו-לומינסצנטי.
צלם תמונות במרווחי זמן קבועים כדי לנטר אות זה.
עצב הראייה נמצא ליד פני השטח, מה שהופך את הביו-לומינסנציה סביב העיניים לבולטת. לעומת זאת, אותות מהמוח חלשים כאשר הגולגולת סופגת את האור הנפלט.
בתמונה, כחול מציין דלקת קלה, ואדום מציין דלקת חמורה.
כדי לבצע הדמיה in vivo, שמור את העכברים תחת הרדמה של 2 עד 2.5% איזופלורן במהלך כל הליכי ההדמיה. מקם שני עכברים אחד ליד השני במנגנון, ומקם את עמוד השדרה העליון של העכברים במרכז.
לאחר מכן, הגן על אתר החיסון בבד שחור. פתח את התוכנה לצילום תמונות ואתחל את המצלמה. לאחר מכן, צלמו תמונה בסיסית כדי להעריך את המיקום הנכון של העכברים.
לאחר מכן, השתמש בפוקוס B עם מרחק של 6.5 סנטימטר למצלמה לצילום כל התמונות. לאחר מכן, מערבבים את המגיב הכימילומינסנט המוכן לשימוש ב-40 מיליגרם למיליליטר לפני מילוי המזרק. לאחר מכן, הזרקו 100 מיקרוליטר ממנו לעכברים תוך צפקית וצלמו את תמונות הביו-לומינסנציה 5, 10 ו-15 דקות לאחר ההזרקה.