אנציקלופדיית הניסויים של JoVE
מדעי המוח
0 צפיות • 2:31 דק׳ • May 29th, 2025
התחל עם תא הדמיה המכיל צמח מוח דרוזופילה משותק שקוע במאגר כדי לשמור על תפקוד התא.
הנוירונים במוח מבטאים מדדי סידן פלואורסצנטיים ציטופלזמיים, הנקשרים ליוני סידן ופלואורסצ.
הנח את תא ההדמיה מתחת למיקרוסקופ פלואורסצנטי המצויד בעדשת טבילה במים.
הורידו את העדשה, ותחת תאורת שדה בהיר, התמקדו במוח.
עברו למצב פלואורסצנטי וצלמו את התמונה.
לאחר מכן, הכנס נוירופפטיד למאגר והתחל הקלטת זמן-lapse.
הנוירופפטיד נקשר לקולטן שלו על נוירונים, ומפעיל איתות תוך תאי. זה פותח את תעלות הסידן ומאפשר את זרם יוני הסידן.
יוני סידן אלה נקשרים לאינדיקטורים ומגבירים את עוצמת הקרינה.
צלם מחדש את התמונה לאחר גירוי נוירופפטיד.
השווה את התמונות לפני ואחרי גירוי נוירופפטיד.
עלייה בעוצמת הקרינה לאחר גירוי נוירופפטיד משקפת את תגובת המוח של דרוזופילה לאיתות נוירופפטיד.
כדי להשיג תמונות פלואורסצנטיות של סידן, מקם את תא ההדמיה המכיל את צמח המוח מתחת למיקרוסקופ. הורד את עדשת האובייקט עד שהיא נוגעת ב-PBS. ותחת תאורת שדה בהיר, מקם את המוח והבא אותו למיקוד.
עבור לאור פלורסנט והתאם את המיקוד על התאים המסומנים ב-GCaMP6. התחל את הרכישה ב-250 אלפיות השנייה למסגרת ברזולוציה של 512 על 512 פיקסלים במצב מקורר מים. לאחר מכן, כוונן את זמן החשיפה כדי לקבל את ערכי הקרינה בטווח הדינמי של מצלמת CCD, אך לא נמוך מ-1,000 יחידות שרירותיות עם תמונות של 16
צפו בתמליל המלא וקבלו גישה לאלפי סרטונים מדעיים