הדמיה חיה של פעילות הריסים של תאים אפנדימליים בקטע מוח של עכבר

קח קטע סגיטלי של מוח עכבר כדי לחשוף את החדרים, שהם חללים מלאים בנוזל מוחי שדרתי, או CSF.

לתאים האפנדימליים המצפים את החדרים יש ריסים תנועתיים המניעים CSF כדי להקל על זרימת הדם שלו.

מניחים את החלק בכלי עם תחתית זכוכית המכיל מדיום עשיר בחומרים מזינים כדי לשמור על פעילות הריסים.

העבירו את הצלחת לתא מבוקר האקלים של מיקרוסקופ ניגוד הפרעות דיפרנציאלי, או DIC, כדי לשמור על כדאיות התא במהלך ההדמיה.

מיקרוסקופ DIC משתמש בפריזמה כדי לפצל אור מקוטב, ומכוון אותו דרך הדגימה לאורך נתיבים שונים.

שינויים במקדם השבירה על פני הדגימה מציגים הבדלי פאזה בין הקורות.

מנסרה שנייה משלבת מחדש את הקרניים, ויוצרת הפרעות המייצרות תמונה בעלת ניגודיות גבוהה עם אפקט תלת מימדי, המשפרת את הנראות של מבנים עדינים.

אתר תאים אפנדימליים פונקציונליים עם ריסים תנועתיים על ידי התבוננות בתנועת הבועות הנוצרת על ידי פעימתם.

באמצעות הדמיית DIC בעלת ניגודיות גבוהה, רשום את הריסים כדי לכמת את תדירות הפעימות שלהם.

כדי לדמות את החלקים, הנח את פרוסות המוח בכלי תרבית תחתית זכוכית בגודל 30 מילימטר המכילים 1 מיליליטר של מדיום גבוה גלוקוז, והתאם את סביבת תא המיקרוסקופ הסגורה ל-37 מעלות צלזיוס ו-5% פחמן דו חמצני, באמצעות עדשת טבילה בשמן אובייקטיבי פי 60.

לאחר מכן, התמקדו בתאים עם אור מועבר DIC רגיל. לאחר מכן, בעקבות כיוון תנועת בועת ה-DMEM, כמדריך למיקום הריסים האפנדימליים הנעים, השתמשו במסנן DIC כדי לבחור אזור המכיל תאים בריאים עם ריסים תנועתיים בחדר הצדדי של המוח. עם זיהוי הריסים האפנדימליים, התאם את האור והמיקוד כדי לקבל תמונה משביעת רצון.

לאחר מכן, הגדר את פרמטרי ההדמיה החיה בתוכנת ההדמיה. לדוגמה, כאן נרכשות תמונות של 24 סיביות, כאשר שילוב המצלמה מוגדר ל-1 כפול 1, בשילוב עם המטרה של 60x, וזמן חשיפה של 5 עד 10 אלפיות השנייה.

פתח את צמצם המיקרוסקופ לרמה האופטימלית לזמן חשיפה מינימלי, ואסוף את תמונות ה-DIC. צפה בזרם התמונות החיות למצלמה כדי לספק רכישת תמונה מהירה ומיידית ללא דיחוי. לאחר מכן ניתן לחשב את מהירות פעימות הריסים על סמך הדרישה של זמני החשיפה המינימליים להשגת ניגודיות תמונה מספקת.